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在使用 Opentrons Flex NGS 工作站處理 48 樣本的實(shí)驗(yàn)流程中重要的,優(yōu)化板位布局是提升實(shí)驗(yàn)效率深刻變革、保障實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。合理的板位布局能夠減少移液路徑和諧共生、避免交叉污染,充分發(fā)揮工作站的自動(dòng)化優(yōu)勢(shì)適應性強。以下將從遵循實(shí)驗(yàn)流程邏輯技術交流、考慮移液器操作特點(diǎn)、規(guī)避潛在干擾因素等方面拓展,詳細(xì)介紹優(yōu)化板位布局的方法創造更多。
一、遵循實(shí)驗(yàn)流程邏輯規(guī)劃板位
確定關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)步驟順序:以常見的 NGS 文庫(kù)制備流程為例不斷進步,一般包含樣本裂解工藝技術、磁珠純化、PCR 擴(kuò)增等步驟規模。在布局板位時(shí)近年來,應(yīng)按照這些步驟的先后順序,將對(duì)應(yīng)的耗材和試劑放置在相鄰或易于操作的位置節點。比如通過活化,將裝有樣本的 96 孔板放置在靠近工作站入口且方便移液器取液的位置,作為起始操作點(diǎn)的特點。隨后健康發展,將用于樣本裂解的試劑槽就近放置,使移液器能夠快速在樣本孔板和試劑槽之間移液大數據,完成裂解液添加操作長效機製,減少移液行程,提高實(shí)驗(yàn)效率數字技術。
整合同類操作耗材:對(duì)于涉及多次重復(fù)相同操作的步驟奮戰不懈,將相關(guān)耗材集中放置。在磁珠純化過(guò)程中範圍和領域,磁珠儲(chǔ)存管有所增加、清洗液試劑槽以及用于收集洗脫液的孔板應(yīng)緊密排列。這樣,96 通道移液器在進(jìn)行多輪磁珠吸附越來越重要的位置、清洗新技術、洗脫操作時(shí),無(wú)需頻繁更換移液路徑順滑地配合,能夠高效地對(duì)多個(gè)樣本同時(shí)進(jìn)行處理深入,降低操作復(fù)雜度,減少因操作不當(dāng)導(dǎo)致的誤差前沿技術。
二基礎、依據(jù)移液器特性安排板位
適配移液器類型與通道數(shù):Opentrons Flex NGS 工作站配備多種移液器,如 2x8 通道移液器和 96 通道移液器多種方式。若使用 2x8 通道移液器處理 48 樣本對外開放,可將樣本孔板按每 8 個(gè)樣本一組進(jìn)行劃分,對(duì)應(yīng)移液器的 8 個(gè)通道深入交流研討,將每組樣本孔板放置在移液器一次操作能夠覆蓋的區(qū)域內(nèi)資料,確保移液器的每個(gè)通道都能準(zhǔn)確、高效地吸取和分配液體關註度。對(duì)于 96 通道移液器橫向協同,雖然處理 48 樣本時(shí)無(wú)需全部通道工作,但仍要保證孔板放置位置能使移液器輕松對(duì)準(zhǔn)樣本孔敢於挑戰,避免出現(xiàn)通道與孔位不匹配或移液偏差的情況長遠所需。
考慮移液器移液范圍與精度:不同量程的移液器在移液精度上存在差異。在板位布局時(shí)讓人糾結,將需要高精度移液的操作(如添加珍貴的酶試劑規模、進(jìn)行微量體積的樣本轉(zhuǎn)移)對(duì)應(yīng)的耗材放置在移液器精度較高的工作區(qū)域。一般來(lái)說(shuō)管理,移液器在接近其最大量程的 10% - 90% 范圍內(nèi)移液精度較高優化上下。例如,對(duì)于 1 - 50μL 量程的移液器模樣,在處理 10 - 45μL 體積的液體轉(zhuǎn)移時(shí)精度更有保障生產體系,可將相關(guān)試劑瓶或樣本孔板設(shè)置在該移液器執(zhí)行此類移液操作最便捷的位置,以確保實(shí)驗(yàn)中關(guān)鍵液體量的準(zhǔn)確性很重要。
三能力和水平、規(guī)避干擾與提高操作便利性
減少交叉污染風(fēng)險(xiǎn):為防止不同樣本、試劑之間發(fā)生交叉污染異常狀況,在板位布局上要嚴(yán)格區(qū)分不同功能區(qū)域研究。將陽(yáng)性對(duì)照樣本、陰性對(duì)照樣本與實(shí)驗(yàn)樣本的孔板分開擺放應用創新,且保持一定距離提高,避免移液器在操作過(guò)程中因意外導(dǎo)致液體飛濺而造成交叉污染機構。同時(shí),對(duì)于使用過(guò)的吸頭丟棄區(qū)和廢液收集區(qū)交流,應(yīng)設(shè)置在遠(yuǎn)離樣本和試劑的位置基礎,且要有明顯標(biāo)識(shí),確保工作站機(jī)械臂在丟棄吸頭和傾倒廢液時(shí)不會(huì)對(duì)其他實(shí)驗(yàn)操作產(chǎn)生干擾還不大。
優(yōu)化操作空間與機(jī)械臂移動(dòng)路徑:充分考慮工作站內(nèi)部機(jī)械臂高產、移液器等組件的移動(dòng)空間,避免在板位布局上出現(xiàn)耗材或設(shè)備相互阻擋的情況發揮作用。確保機(jī)械臂在抓取良好、移動(dòng)孔板以及移液器進(jìn)行移液操作時(shí),能夠順暢運(yùn)行銘記囑托,不受阻礙引領。例如,不要將體積較大的試劑瓶放置在機(jī)械臂移動(dòng)路徑上示範,以免發(fā)生碰撞勞動精神,影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。同時(shí)結構不合理,合理安排板位高度,使移液器在不同高度的耗材之間移液時(shí)逐步改善,能夠以最短的垂直行程進(jìn)行操作意見征詢,減少能耗和操作時(shí)間。
通過(guò)遵循實(shí)驗(yàn)流程邏輯大大提高、依據(jù)移液器特性以及規(guī)避干擾因素等多方面優(yōu)化板位布局的必然要求,Opentrons Flex NGS 工作站在處理 48 樣本時(shí)能夠顯著提升實(shí)驗(yàn)效率、保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性取得了一定進展,為科研工作者在 NGS 實(shí)驗(yàn)中提供有力支持完善好。
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