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BCA(二喹啉甲酸)法

一種比色測定法協同控製,用于確定溶液中蛋白質(zhì)的濃度。BCA 分析法的主要目的是量化樣品中的蛋白質(zhì)含量,這對分子生物學和蛋白質(zhì)組學的各種下游應(yīng)用至關(guān)重要利用好。

需要進行 BCA 法的工作流程:

  • 蛋白質(zhì)純化過程,以確定產(chǎn)量和純度解決問題。
  • 凝膠電泳前系列,確保蛋白負載量相等。
  • 蛋白質(zhì)標記或修飾前相互配合,確保使用了正確量的蛋白質(zhì)慢體驗。
  • 細胞培養(yǎng)研究中,確定蛋白質(zhì)表達水平智能化。

BCA 檢測的最佳方法

標準 BCA 法

最適合蛋白質(zhì)濃度范圍在測定線性范圍內(nèi)科技實力、樣品數(shù)量適中的常規(guī)應(yīng)用。

流程:
  1. 樣品制備: 首先收集和制備蛋白質(zhì)樣本建設,確保樣本中不含干擾物質(zhì)在此基礎上。
  2. 制備 BCA 工作試劑: 這通常包括將 BCA 溶液與硫酸銅(II)溶液按特定比例混合,通常由檢測試劑盒制造商提供前來體驗。
  3. 混合與孵育: 通常在比色皿或試管中將蛋白質(zhì)樣品加入 BCA 工作試劑自主研發。通常在 37℃下孵育混合物 30 分鐘。
  4. 測量: 孵育結(jié)束后更加廣闊,使用分光光度計在 562 nm波長處測量每個樣品的吸光度損耗。
  5. 分析: 將吸光度值與標準蛋白質(zhì)(通常是牛血清白蛋白 (BSA))的吸光度值進行比較,以確定樣品的蛋白質(zhì)濃度非常完善。

微孔板 BCA 法

非常適合需要同時分析許多樣品的高通量篩選性能穩定。它的試劑使用效率高系統,常用于大型研究或工業(yè)環(huán)境增產。

流程:
  1. 樣品制備: 與標準檢測一樣,首先制備蛋白質(zhì)樣品機遇與挑戰。
  2. BCA 工作試劑: 制備相同的試劑發揮重要作用,但要根據(jù)微孔板孔調(diào)整體積醒悟。
  3. 分裝和孵育: 使用多通道移液器將蛋白質(zhì)樣品和 BCA 工作試劑分裝到 96 孔板的孔中。通常在 37℃ 孵育 30 分鐘高質量。
  4. 測量: 使用微孔板閱讀器在 562 nm波長處測量吸光度也逐步提升。
  5. 分析: 與標準方法一樣,使用標準曲線確定蛋白質(zhì)濃度註入了新的力量。

針對含去垢劑樣品的改良 BCA 法

專門用于含有去垢劑的樣本認為,因為去垢劑會干擾 BCA 反應(yīng)。這種情況常見于從某些細胞類型或組織中提取蛋白質(zhì)新趨勢,或研究包埋在膜中的蛋白質(zhì)時反應能力。

流程:
  1. 樣品制備: 提取樣品中的蛋白質(zhì),注意去垢劑的濃度。
  2. BCA 工作試劑: 按標準檢測方法配制結構重塑。
  3. 添加洗滌劑相容性試劑: 這些試劑通常在專門的 BCA 試劑盒中提供聽得懂,添加這些試劑是為了消除去垢劑的干擾作用。
  4. 混合與孵育: 與標準測定一樣高質量發展,混合樣品和工作試劑并孵育全方位。
  5. 測量與分析: 使用分光光度計測量吸光度,并通過標準曲線確定蛋白質(zhì)濃度影響力範圍。

BCA 法從未如此簡單

OT-2 是一款臺面式液體工作站大局,設(shè)計方便靈活,可自動處理許多常見應(yīng)用邁出了重要的一步。

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如何實現(xiàn) BCA 法的自動化:

  • 液體處理工作站: 這些機器設(shè)計用于自動將液體移液到指定容器中有序推進,確保準確性和一致性。
  • 集成系統(tǒng): 有些平臺集成了從樣品添加到讀取吸光度的整個過程需求,從而簡化了工作流程堅定不移。
  • 軟件: 自動化軟件可用于設(shè)置協(xié)議,確保每次檢測都以相同的方式進行真諦所在。

與手動移液相比指導,自動化 BCA 法的優(yōu)勢:

  • 一致性: 自動化可確保每次都以相同的方式執(zhí)行每個步驟,從而減少可變性充分。
  • 效率: 自動化系統(tǒng)可同時處理多個樣本進一步完善,加快處理速度。
  • 準確性: 自動移液減少了體積錯誤和交叉污染的風險競爭力。
  • 數(shù)據(jù)完整性: 自動化系統(tǒng)通常配有集成的數(shù)據(jù)管理解決方案調整推進,可確保正確記錄和存儲結(jié)果。

協(xié)議聚焦

Opentrons 可幫助您使用 OT-2 和 Opentrons Flex 的開源協(xié)議實現(xiàn) BCA 檢測自動化

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