需要進行 BCA 法的工作流程:
- 蛋白質(zhì)純化過程,以確定產(chǎn)量和純度解決問題。
- 凝膠電泳前系列,確保蛋白負載量相等。
- 蛋白質(zhì)標記或修飾前相互配合,確保使用了正確量的蛋白質(zhì)慢體驗。
- 細胞培養(yǎng)研究中,確定蛋白質(zhì)表達水平智能化。
BCA 檢測的最佳方法
標準 BCA 法
最適合蛋白質(zhì)濃度范圍在測定線性范圍內(nèi)科技實力、樣品數(shù)量適中的常規(guī)應(yīng)用。
流程:
- 樣品制備: 首先收集和制備蛋白質(zhì)樣本建設,確保樣本中不含干擾物質(zhì)在此基礎上。
- 制備 BCA 工作試劑: 這通常包括將 BCA 溶液與硫酸銅(II)溶液按特定比例混合,通常由檢測試劑盒制造商提供前來體驗。
- 混合與孵育: 通常在比色皿或試管中將蛋白質(zhì)樣品加入 BCA 工作試劑自主研發。通常在 37℃下孵育混合物 30 分鐘。
- 測量: 孵育結(jié)束后更加廣闊,使用分光光度計在 562 nm波長處測量每個樣品的吸光度損耗。
- 分析: 將吸光度值與標準蛋白質(zhì)(通常是牛血清白蛋白 (BSA))的吸光度值進行比較,以確定樣品的蛋白質(zhì)濃度非常完善。
微孔板 BCA 法
非常適合需要同時分析許多樣品的高通量篩選性能穩定。它的試劑使用效率高系統,常用于大型研究或工業(yè)環(huán)境增產。
流程:
- 樣品制備: 與標準檢測一樣,首先制備蛋白質(zhì)樣品機遇與挑戰。
- BCA 工作試劑: 制備相同的試劑發揮重要作用,但要根據(jù)微孔板孔調(diào)整體積醒悟。
- 分裝和孵育: 使用多通道移液器將蛋白質(zhì)樣品和 BCA 工作試劑分裝到 96 孔板的孔中。通常在 37℃ 孵育 30 分鐘高質量。
- 測量: 使用微孔板閱讀器在 562 nm波長處測量吸光度也逐步提升。
- 分析: 與標準方法一樣,使用標準曲線確定蛋白質(zhì)濃度註入了新的力量。
針對含去垢劑樣品的改良 BCA 法
專門用于含有去垢劑的樣本認為,因為去垢劑會干擾 BCA 反應(yīng)。這種情況常見于從某些細胞類型或組織中提取蛋白質(zhì)新趨勢,或研究包埋在膜中的蛋白質(zhì)時反應能力。
流程:
- 樣品制備: 提取樣品中的蛋白質(zhì),注意去垢劑的濃度。
- BCA 工作試劑: 按標準檢測方法配制結構重塑。
- 添加洗滌劑相容性試劑: 這些試劑通常在專門的 BCA 試劑盒中提供聽得懂,添加這些試劑是為了消除去垢劑的干擾作用。
- 混合與孵育: 與標準測定一樣高質量發展,混合樣品和工作試劑并孵育全方位。
- 測量與分析: 使用分光光度計測量吸光度,并通過標準曲線確定蛋白質(zhì)濃度影響力範圍。