摘要
檢測(cè)SARS-CoV-2中和抗體的可靠血清學(xué)檢測(cè)是公共衛(wèi)生和臨床目的的有用工具使用。用于檢測(cè)中和抗體的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISAs）已從FDA頒發(fā)了緊急使用授權(quán)（EUA）廣度和深度。除了傳統(tǒng)的elisa抗體（如RBD）抗原偶聯(lián)磁珠基elisa被固定在96孔板的表面，已經(jīng)成為一種具有幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)的替代方法。我們有開發(fā)了一種基于珠子的ELISA，用于檢測(cè)SARS-CoV-2中和抗體全過程。這種方法需要單獨(dú)的儀器來執(zhí)行主要步驟，如液體轉(zhuǎn)移，清洗和搖晃認為。在OT-2平臺(tái)上簡(jiǎn)化了該實(shí)驗(yàn)磁模塊和加熱器搖振器，一個(gè)協(xié)議設(shè)計(jì)和檢測(cè)新趨勢，以處理收集自COVID-19患者的血清樣本反應能力。從ACROBio系統(tǒng)公司獲得的RBD偶聯(lián)磁珠也進(jìn)行了測(cè)試并對(duì)使用相同的協(xié)議進(jìn)行了比較。

主要調(diào)查結(jié)果
配備了磁性模塊和加熱震器模塊的OT-2展示了對(duì)SARS-CoV-2進(jìn)行珠狀elisa的能力中和性抗體檢測(cè)精度較高學習。
在更高的吞吐量設(shè)置中結構重塑，該協(xié)議可以用最少的動(dòng)手時(shí)間處理多達(dá)96個(gè)樣品。

介紹
例如應用優勢，在識(shí)別出病毒成分后高質量發展，細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)會(huì)觸發(fā)針對(duì)病毒抗原的中和抗體的分泌
存在核衣殼(N)蛋白和刺突(S)蛋白治療嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合征冠狀病毒2（SARS-CoV-2）「咝Ч澞?？贵w檢測(cè)可用于檢測(cè)由于病毒感染而導(dǎo)致的血清中這些中和抗體的存在影響力範圍，提供解決人群或過去SARS-CoV-2感染的信息，以更好地了解SARS-CoV-2的流行病學(xué)新創新即將到來。這些測(cè)試是在臨床試驗(yàn)中確定疫苗效力的常用工具以及在大規(guī)模接種疫苗之后邁出了重要的一步。
抗體測(cè)試通常使用酶印免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），一種技術(shù)它可以檢測(cè)和量化目標(biāo)分子抗體)通過高度特異性的抗體-抗原相互作用設施。對(duì)于一個(gè)典型的夾層ELISA用于抗體檢測(cè)需求，第一步是將SARS-CoV-2抗原附著在固體表面96孔或12孔的條紋，它們可以組裝在一個(gè)與96孔酶標(biāo)儀兼容的框架上組合運用。然后這些樣本被添加到井中更讓我明白了，以及抗sars-CoV-2抗體通過與抗原結(jié)合而捕獲并固定。檢測(cè)抗體競爭力，通常是一種能識(shí)別人IgG并攜帶辣根的抗體使用過氧化物酶（HRP）充分，并在酶的底物的存在下，產(chǎn)生一個(gè)比色信號(hào)并且可以被測(cè)量和量化集聚。吸光度與樣品中抗sars-cov-2中和抗體的水平成正比競爭力。
或者，磁珠也可以作為elisa中的固體表面狀況。其優(yōu)點(diǎn)包括一個(gè)增加的在整個(gè)樣品處理過程中機製性梗阻，可用的表面積和珠子的均勻分布，可以實(shí)現(xiàn)更快速和靈敏的檢測(cè)低分析物濃度建立和完善。我們開發(fā)了一種基于珠子的ELISA提供了遵循，用于檢測(cè)SARS-CoV-2病毒的中和抗體。該檢測(cè)方法利用了SARS-CoV-2的受體結(jié)合域（RBD）S蛋白作為捕獲抗原，賽默費(fèi)雪herDynabeads（沃爾瑟姆服務效率，MA明確相關要求，USA）作為固體表面。
盡管檢測(cè)設(shè)計(jì)多樣統籌發展，elisa通常遵循類似的工作流深化涉外。一般步驟包括試劑轉(zhuǎn)移、孵育和重復(fù)洗滌生產製造￠_展試點；谥榈膃lisa程序需要單獨(dú)的儀器來執(zhí)行這些步驟，這可能在Opentrons OT-2平臺(tái)上自動(dòng)化磁性模塊和加熱器振動(dòng)器共同。我們開發(fā)了一個(gè)簡(jiǎn)化檢測(cè)方案推進一步，以避免多種儀器的需要，并減少實(shí)際操作時(shí)間簡單化。該方案還使用ACROBio系統(tǒng)公司的RBD偶軛磁珠（Newark力度，DE，USA）進(jìn)行驗(yàn)證優勢，以確認(rèn)OT-2樣品處理的質(zhì)量善謀新篇。

材料和方法
在視中心OT-2上測(cè)試的ELISA示意圖，完成分析的步驟大綱便利性，以及甲板布置圖（圖1）
將60 μg SARS-CoV-S-2S蛋白his標(biāo)記RBD結(jié)合制備RBD偶聯(lián)珠（acro生物系統(tǒng)公司方法，紐瓦克，DE提供有力支撐，美國(guó)）至5毫克迪納比德（賽默費(fèi)舍爾切實把製度，沃爾瑟姆，馬薩諸塞州自行開發，美國(guó)）進行部署，超順磁性球形聚合物粒子為磁分離生物材料，然后儲(chǔ)存在2.5 mL的封閉緩沖液中應用情況。相同的協(xié)議也是通過使用市售的RBD進(jìn)行測(cè)試的嗎美國(guó)生物系統(tǒng)的預(yù)涂層珠(36 μg RBD每毫克珠子）保護好。人抗sars-cov-2S1抗體作為標(biāo)準(zhǔn)抗體和小鼠單克隆抗人抗體以HRP偶聯(lián)作為檢測(cè)抗體的IgG Fc購自細(xì)胞科學(xué)公司（紐伯里波特，MA表現，美國(guó)）和Abcam公司（劍橋運行好，英國(guó)），定制的檢測(cè)緩沖液分別由. 特諾瓦（霍利斯特可能性更大，加利福尼亞州部署安排，美國(guó)）。
液體轉(zhuǎn)移由8通道移液管進(jìn)行技術。ELISA板被放置在磁模塊上推廣開來，并手動(dòng)移動(dòng)到加熱器模塊如果需要攪拌推動。本研究獲得了以前檢測(cè)為SARS-CoV-2抗體陽性或陰性的血清樣本。實(shí)驗(yàn)完成后資源配置，立即用比色平板儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定每個(gè)樣品的吸光度信息。的運(yùn)行時(shí)對(duì)不同樣本量下的每種檢測(cè)方法進(jìn)行了估計(jì)（表1）。

結(jié)果
為了生成測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)曲線相互融合，在OT-2上首要任務，用50 μL的RBD偶聯(lián)珠子懸液進(jìn)行檢測(cè)轉(zhuǎn)移到96孔2 mL深孔板的每個(gè)孔中，預(yù)裝有連續(xù)2倍稀釋的人抗-SARS-CoV-2 S1抗體不同需求，檢測(cè)方法見材料和方法。測(cè)量了吸光度保持穩定，并進(jìn)行了劑量反應(yīng)曲線繪制總之。結(jié)果表明支撐作用，OT-2進(jìn)行該檢測(cè)的精度（CV<10%）（圖2A）研學體驗，并且在100 ng/mL到ng/mL之間的檢測(cè)讀數(shù)與抗體濃度之間存在極好的線性關(guān)聯(lián)12.5 ng/mL（r平方>0.99）（圖2B）。

來自宏宏生物系統(tǒng)的RBD預(yù)涂層珠然后重組（每mL阻斷緩沖液1mg珠子），并在OT-2上使用相同的方案進(jìn)行測(cè)試。制備連續(xù)2倍稀釋的人抗sars-cov-2S1抗體有所增加，并暴露于20 μL面包懸液中更高要求。這些數(shù)據(jù)被用于繪制劑量-反應(yīng)曲線越來越重要的位置，以供進(jìn)一步分析。OT-2上樣品處理的一致性（CV<10%）（圖3A）和檢測(cè)讀數(shù)與抗體濃度的線性關(guān)系均得到了證實(shí)（100 ng/mL至6.25 ng/mL不要畏懼，r平方>0.99）（圖3B）。

為了進(jìn)行基于珠子的ELISA問題，以確定SARS-CoV-2 S1中和抗體的水平逐漸顯現，該方案設(shè)計(jì)用于RBD偶聯(lián)珠子的制備房子或美國(guó)生物系統(tǒng)公司的RBD共軛面包是用于處理之前由傳統(tǒng)的、fda認(rèn)證的ELISA檢測(cè)的血清樣本（陽性： *）緊密相關。結(jié)果再次顯示了OT-2液體處理的精度（CV <為10%）和抗體濃度根據(jù)圖4所示的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到更默契了。

對(duì)OT-2抗體的抗體中和試驗(yàn)

在OT-2上的基于珠子的ELISA

結(jié)論
基于珠的elisa可以在配備磁模塊和的OT-2平臺(tái)上成功進(jìn)行加熱器振動(dòng)器模塊優化上下。結(jié)果表明優(yōu)良的樣品處理質(zhì)量，該方案適合處理最少的多達(dá)96個(gè)樣品實(shí)際操作時(shí)間模樣。