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NGS自動化建庫是指利用自動化技術和設備節點,對DNA或RNA樣本進行高通量溝通協調、高效率、高精度的文庫構建過程。這一過程涵蓋了從樣本處理發力、DNA/RNA提取生動、文庫構建到質控等多個環(huán)節(jié),旨在減少人工操作多樣性,提高實驗效率和準確性發揮效力。
一、樣本準備與DNA/RNA提取
1、樣本收集:收集目標樣本安全鏈,如細胞顯示、組織、血液等處理方法,確保樣本的完整性和代表性重要作用。
2、樣本處理:根據樣本類型選擇合適的處理方法習慣,如細胞裂解充足、組織研磨等,以釋放DNA或RNA的積極性。
3綠色化發展、DNA/RNA提取:采用合適的提取方法(如酚氯仿法不久前、磁珠法用上了、柱子法等)從樣本中純化出高質量的DNA或RNA。
二能力建設、文庫構建
文庫構建是NGS自動化建庫的核心步驟關註,通常包括以下子步驟:
1、DNA/RNA片段化:
1>將DNA或RNA分子切割成較小的片段無障礙,以便進行后續(xù)的測序反應連日來。片段化可以通過物理方法(如超聲波破碎)或化學方法實現。
2>片段大小通常在100-1000堿基對之間認為,具體取決于測序平臺和實驗需求系統。
2、末端修復和加A尾:
1>對片段化的DNA或RNA進行末端修復重要意義,以去除末端損傷并添加磷酸基團和3’末端A尾交流等。這些修復步驟有助于后續(xù)的連接適配體和文庫擴增。
3規劃、連接適配體:
1>將經過修復的DNA或RNA片段連接到特定的適配體(也稱為接頭)上提高。適配體是含有特定序列的DNA或RNA片段,用于后續(xù)的PCR擴增和測序反應進入當下。
2>在自動化建庫過程中深刻內涵,這一步驟通常通過自動化的移液和連接反應實現。
4融合、文庫擴增:
1>通過PCR擴增將連接了適配體的DNA或RNA片段擴增至足夠數量深入闡釋,以形成可用于測序的文庫。
2>擴增過程中使用具有適配體序列的引物進行特異性擴增完成的事情。
三物聯與互聯、文庫質控
文庫質控是確保文庫質量和測序結果可靠性的重要步驟穩定。常用的文庫質控方法包括:
1、定量PCR:用于檢測文庫的濃度和擴增效率供給。
2優勢與挑戰、聚丙烯酰胺凝膠電泳:用于評估文庫片段的大小分布。
3、質譜分析:用于進一步驗證文庫的質量和純度。
四智能設備、功能:
1、自動化操作:通過自動化設備實現樣本處理一站式服務、文庫構建等步驟的自動化,減少人工干預深入交流。
2引領作用、提高效率:自動化流程縮短了實驗周期,提高了實驗效率臺上與臺下。
3用的舒心、降低誤差:減少人為操作帶來的誤差,提高實驗結果的準確性和穩(wěn)定性集聚效應。
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