摘要
檢測SARS-CoV-2中和抗體的可靠血清學檢測是公共衛(wèi)生和臨床目的的有用工具。用于檢測中和抗體的酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISAs）已從FDA頒發(fā)了緊急使用授權(quán)（EUA）。除了傳統(tǒng)的elisa抗體（如RBD）抗原偶聯(lián)磁珠基elisa被固定在96孔板的表面體驗區，已經(jīng)成為一種具有幾個優(yōu)點的替代方法。我們有開發(fā)了一種基于珠子的ELISA統籌推進，用于檢測SARS-CoV-2中和抗體。這種方法需要單獨的儀器來執(zhí)行主要步驟實事求是，如液體轉(zhuǎn)移無障礙，清洗和搖晃。在OT-2平臺上簡化了該實驗磁模塊和加熱器搖振器，一個協(xié)議設計和檢測重要的角色，以處理收集自COVID-19患者的血清樣本開放要求。從ACROBio系統(tǒng)公司獲得的RBD偶聯(lián)磁珠也進行了測試并對使用相同的協(xié)議進行了比較。

主要調(diào)查結(jié)果
配備了磁性模塊和加熱震器模塊的OT-2展示了對SARS-CoV-2進行珠狀elisa的能力中和性抗體檢測精度較高平臺建設。
在更高的吞吐量設置中服務機製，該協(xié)議可以用最少的動手時間處理多達96個樣品。

介紹
例如推動並實現，在識別出病毒成分后薄弱點，細胞介導的免疫反應會觸發(fā)針對病毒抗原的中和抗體的分泌
存在核衣殼(N)蛋白和刺突(S)蛋白治療嚴重急性呼吸系統(tǒng)綜合征冠狀病毒2（SARS-CoV-2）灮潭?？贵w檢測可用于檢測由于病毒感染而導致的血清中這些中和抗體的存在，提供解決人群或過去SARS-CoV-2感染的信息奮勇向前，以更好地了解SARS-CoV-2的流行病學不斷豐富。這些測試是在臨床試驗中確定疫苗效力的常用工具以及在大規(guī)模接種疫苗之后。
抗體測試通常使用酶印免疫吸附試驗（ELISA）組建，一種技術(shù)它可以檢測和量化目標分子抗體)通過高度特異性的抗體-抗原相互作用各有優勢。對于一個典型的夾層ELISA用于抗體檢測，第一步是將SARS-CoV-2抗原附著在固體表面96孔或12孔的條紋重要的意義，它們可以組裝在一個與96孔酶標儀兼容的框架上持續。然后這些樣本被添加到井中，以及抗sars-CoV-2抗體通過與抗原結(jié)合而捕獲并固定持續發展。檢測抗體必然趨勢，通常是一種能識別人IgG并攜帶辣根的抗體使用過氧化物酶（HRP），并在酶的底物的存在下擴大，產(chǎn)生一個比色信號并且可以被測量和量化多樣性。吸光度與樣品中抗sars-cov-2中和抗體的水平成正比。
或者新格局，磁珠也可以作為elisa中的固體表面明顯。其優(yōu)點包括一個增加的在整個樣品處理過程中，可用的表面積和珠子的均勻分布顯示，可以實現(xiàn)更快速和靈敏的檢測低分析物濃度創新為先。我們開發(fā)了一種基于珠子的ELISA，用于檢測SARS-CoV-2病毒的中和抗體科普活動。該檢測方法利用了SARS-CoV-2的受體結(jié)合域（RBD）S蛋白作為捕獲抗原創新延展，賽默費雪herDynabeads（沃爾瑟姆，MA充足，USA）作為固體表面進展情況。
盡管檢測設計多樣，elisa通常遵循類似的工作流。一般步驟包括試劑轉(zhuǎn)移至關重要、孵育和重復洗滌不久前。基于珠的elisa程序需要單獨的儀器來執(zhí)行這些步驟提升行動，這可能在Opentrons OT-2平臺上自動化磁性模塊和加熱器振動器能力建設。我們開發(fā)了一個簡化檢測方案，以避免多種儀器的需要研究進展，并減少實際操作時間無障礙。該方案還使用ACROBio系統(tǒng)公司的RBD偶軛磁珠（Newark，DE快速融入，USA）進行驗證認為，以確認OT-2樣品處理的質(zhì)量。

材料和方法
在視中心OT-2上測試的ELISA示意圖增強，完成分析的步驟大綱重要意義，以及甲板布置圖（圖1）
將60 μg SARS-CoV-S-2S蛋白his標記RBD結(jié)合制備RBD偶聯(lián)珠（acro生物系統(tǒng)公司，紐瓦克更加廣闊，DE規劃，美國）至5毫克迪納比德（賽默費舍爾，沃爾瑟姆成效與經驗，馬薩諸塞州適應性，美國），超順磁性球形聚合物粒子為磁分離生物材料稍有不慎，然后儲存在2.5 mL的封閉緩沖液中重要作用。相同的協(xié)議也是通過使用市售的RBD進行測試的嗎美國生物系統(tǒng)的預涂層珠(36 μg RBD每毫克珠子）。人抗sars-cov-2S1抗體作為標準抗體和小鼠單克隆抗人抗體以HRP偶聯(lián)作為檢測抗體的IgG Fc購自細胞科學公司（紐伯里波特相關性，MA完成的事情，美國）和Abcam公司（劍橋，英國）穩定，定制的檢測緩沖液分別由. 特諾瓦（霍利斯特改造層面，加利福尼亞州，美國）優勢與挑戰。
液體轉(zhuǎn)移由8通道移液管進行經驗分享。ELISA板被放置在磁模塊上，并手動移動到加熱器模塊如果需要攪拌趨勢。本研究獲得了以前檢測為SARS-CoV-2抗體陽性或陰性的血清樣本有力扭轉。實驗完成后，立即用比色平板儀在450 nm波長下測定每個樣品的吸光度一站式服務。的運行時對不同樣本量下的每種檢測方法進行了估計（表1）廣度和深度。

結(jié)果
為了生成測試的標準曲線深入交流，在OT-2上，用50 μL的RBD偶聯(lián)珠子懸液進行檢測轉(zhuǎn)移到96孔2 mL深孔板的每個孔中加強宣傳，預裝有連續(xù)2倍稀釋的人抗-SARS-CoV-2 S1抗體臺上與臺下，檢測方法見材料和方法。測量了吸光度技術發展，并進行了劑量反應曲線繪制集聚效應。結(jié)果表明，OT-2進行該檢測的精度（CV<10%）（圖2A）重要手段，并且在100 ng/mL到ng/mL之間的檢測讀數(shù)與抗體濃度之間存在極好的線性關(guān)聯(lián)12.5 ng/mL（r平方>0.99）（圖2B）互動講。

來自宏宏生物系統(tǒng)的RBD預涂層珠然后重組（每mL阻斷緩沖液1mg珠子），并在OT-2上使用相同的方案進行測試像一棵樹。制備連續(xù)2倍稀釋的人抗sars-cov-2S1抗體過程中，并暴露于20 μL面包懸液中。這些數(shù)據(jù)被用于繪制劑量-反應曲線性能穩定，以供進一步分析自動化方案。OT-2上樣品處理的一致性（CV<10%）（圖3A）和檢測讀數(shù)與抗體濃度的線性關(guān)系均得到了證實（100 ng/mL至6.25 ng/mL，r平方>0.99）（圖3B）越來越重要。

為了進行基于珠子的ELISA，以確定SARS-CoV-2 S1中和抗體的水平發揮重要作用，該方案設計用于RBD偶聯(lián)珠子的制備房子或美國生物系統(tǒng)公司的RBD共軛面包是用于處理之前由傳統(tǒng)的醒悟、fda認證的ELISA檢測的血清樣本（陽性： *）。結(jié)果再次顯示了OT-2液體處理的精度（CV <為10%）和抗體濃度根據(jù)圖4所示的標準曲線得到高質量。

對OT-2抗體的抗體中和試驗

在OT-2上的基于珠子的ELISA

結(jié)論
基于珠的elisa可以在配備磁模塊和的OT-2平臺上成功進行加熱器振動器模塊帶動產業發展。結(jié)果表明優(yōu)良的樣品處理質(zhì)量，該方案適合處理最少的多達96個樣品實際操作時間。