測定OT-2上THP-1細胞中過氧化氫水平的自動化分析

瓦蘇達SNair博士. 1金納里·沃森博士11.Optrins實驗室公司不斷豐富。

介紹

沙桂油過氧化氫（H2O2)主要與細胞損傷有關積極參與；然而國際要求，重新生成百美分的研究表明，細胞釋放低水平的H2O2作為正常細胞間的一部分高頻率多路通信過氧化氫的轉運競爭激烈、攝取和釋放的機制生物學效應目前還不為人所知空白區，但對癌癥、干細胞有重要意義細胞和衰老高質量。
雙聯(lián)體紅色試劑是非熒光的基于10-乙酰3,7二羥基苯氧惡嗪的氧化，測定原理簡單它是由辣根過氧化物酶（HRP）催化的設計，在H2O2產生一個紅色熒光產物改進措施，間苯二酚，化學計量比為1：1穩步前行。
樹脂最終產物具有較高的消光系數(shù)這是一種超靈敏的檢測方法，只有10皮摩爾的H2O2在一個100 μL的卷中大大提高；1×10–5U/mL的HRP。
這些讀數(shù)可以用分光光度法測量，也可以用熒光讀數(shù)法測量使用酶標儀進一步推進，激發(fā)530 nm，發(fā)射波590 nm。

材料和方法

OT-2傳承，P300單GEN2移液管多種，P20單GEN2移液管
溫度模塊設置為23°C成就，在協(xié)議結束時設置為37°C系統。
THP-1巨噬細胞樣細胞（ATCC空間廣闊，Manassas，VA，USA）(No服務體系。TIB-202)
無酚紅RPMI 1640培養(yǎng)基（熱費雪科學11835030）
佛波12-肉豆蔻酸13-醋酸酯（PMA）（Sigma Aldrich P1585-1MG）
胎牛血清（胎牛血清）未熱滅活（ATCC，Cat No. 30-2020）
Amplex紅色檢測試劑盒(Cat No.A22188)，包括a) 5X反應緩沖液b) HRP c) DMSO d) Amplex紅色試劑e) 3% H2O2
a)視中心96過濾器尖端架200μL b)96過濾器尖端架20μL c)視中心10管架與獵鷹4 x 50 mL全技術方案，6 x15mL錐形d)視中心24管架與埃彭多夫1.5 mL安全鎖扣帽（兩個）

結論

OT-2可以進行測定H的自動化測定2O2在THP-1細胞
OT-2可以以96孔的格式處理中等到高通量的樣本數(shù)量
OT-2可以模擬人工協(xié)議而不損失時間和高度可重復性

討論

本研究是為了了解像Amplex Red這樣自動檢測H的可行性2O2在OT-2向好態勢。H2O2被證明是一種重要的信號分子，負責代謝活性和幫助補酶激活更加堅強，可以影響細胞形態(tài)供給，并在生長因子的存在下導致增殖持續。細胞外的
H2O2這里使用的細胞系是人類單核細胞應用擴展，THP-1有望。結果表明方案，H可能依賴于濃度2O2不同PMA環(huán)境中的生產速率創新延展。H的關系2O2釋放速率和PMA濃度可能是在10,25 ng/mL時比基礎速率顯著增加之后。OT-2已成功用于NGS、IP中的各種實驗協(xié)議的自動化深入實施，從而簡化了標準試劑盒和分析協(xié)議的使用效果，可以手動勞動密集型快速融入。通過自動化分析步驟交流等，與手動方案相比可以使用，觀察到一致的檢測性能。此外，這還描述了量化過氧化物/過氧化物酶的人工和人工方案之間的移液效率。該協(xié)議能夠給用戶一個小時的實踐時間
11分鐘，如果需要檢測多個不同細胞類型的96孔板，以檢測添加或不添加各種興奮劑或生長因子的過氧化氫水平廣度和深度，這可能是一種有效的方法技術發展。

原文地址：OT-2 海報上 THP-1 細胞過氧化氫水平的自動測定