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C18色譜柱全稱十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱大大縮短,是一種反相色譜柱。其中“C18”指的是固定相的化學(xué)結(jié)構(gòu)持續向好,即色譜柱填料為十八烷基硅烷鍵合相更加廣闊,這種色譜柱的固定相是通過化學(xué)鍵合的十八烷基官能團(tuán)吸附在硅膠基質(zhì)上的。C18色譜柱的原理是基于化合物在C18填充物表面上的親疏水性差異大幅拓展,通過溶劑梯度洗脫來實(shí)現(xiàn)化合物的分離發行速度。具體來說,非極性載體表面具有疏水特性與時俱進,能夠吸附非極性化合物性能,而偏極性的流動(dòng)相中通常包含有機(jī)溶劑和緩沖液,其極性較高綜合運用,在分離中發(fā)揮重要作用供給。
一、新柱活化
1實事求是、沖洗:新柱子在使用前需用純有機(jī)試劑(如甲醇進行探討、乙腈)低流速?zèng)_洗,沖洗體積以20倍柱體積為宜服務水平,以便固定相能充分潤濕十分落實、碳鏈能舒展,使色譜柱的性能達(dá)到最佳狀態(tài)。
2製造業、防脫殼處理:將新柱浸入純甲醇或乙腈溶液中優化服務策略,旋轉(zhuǎn)或以其它方式使其表面完全接觸至少30分鐘。洗去大部分殘留有機(jī)物之后發展基礎,用純水或75%甲醇或乙腈沖洗2~3次直到輸出液為無色無味兩個角度入手。
3、酸堿洗處理:在防脫殼處理完成后同期,使用0.11%的醋酸溶液滴于色譜柱表面并停留約30分鐘生產效率,并徹底用DI水沖洗干凈。然后采用0.11%的氨水溶液吸附含氨基的樣品于柱子上并停留約30分鐘科普活動,之后再次用DI水推出至輸出穩(wěn)定創新延展。
4、梯度洗脫:加入摩爾比1:1的異丙醇和甲酸制成的混合液進(jìn)柱子中長期間,在流速為0.5 mL/min的條件下梯度洗脫(10% B基本情況,3min;40% B高端化,3min力量;95% B,3min提單產,重置至10%過渡三分鐘)深入實施,使其開放性自由膠體的更快恢復(fù)。
二發展空間、日常使用
1效果、樣品處理:確保樣品經(jīng)過適當(dāng)處理,去除雜質(zhì)和干擾物質(zhì)足了準備,以提高分離效果合作關系。
2、流動(dòng)相選擇:根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選擇合適的流動(dòng)相組成和比例深刻內涵。
3傳遞、流速控制:控制適當(dāng)?shù)牧魉伲苊膺^高或過低的流速影響分離效果深入闡釋。
4相關性、壓力監(jiān)測:在使用過程中,注意監(jiān)測色譜柱的壓力變化統籌,及時(shí)發(fā)現(xiàn)并處理異常情況最深厚的底氣。
三、維護(hù)
1振奮起來、沖洗色譜柱:每日實(shí)驗(yàn)結(jié)束后稍有不慎,應(yīng)沖洗色譜柱重要作用,尤其是流動(dòng)相中含有酸或鹽時(shí)等地,需將色譜柱中的酸或鹽沖洗干凈最為顯著,通常建議用10%甲醇水沖洗20倍柱體積。
2規定、避免高水相條件:由于C18柱(極性改性處理的除外)的固定相疏水性較強(qiáng)環境,在使用過程中盡量不要使用高水相條件,若水相比例過高高質量,易引起固定相疏水塌陷相對簡便,導(dǎo)致柱效迅速下降,甚至造成不可逆的負(fù)面影響流程。建議使用過程中水相比例不超過90%合作。
3、再生處理:當(dāng)色譜柱壓力升高助力各業、柱性能下降時(shí)極致用戶體驗,通常為色譜柱被污染,對色譜柱進(jìn)行再生處理可恢復(fù)部分柱效應用。
四建議、長期保存
1、沖洗:長期保存前要將色譜柱沖洗3~4小時(shí)以上相貫通。
2不斷發展、保存溶劑:保存在純有機(jī)試劑或高比例的有機(jī)試劑溶液(如90%甲醇水)中。若第二天需繼續(xù)使用自動化方案,日常保存溶劑也盡量與此相同緊密協作。
五、注意事項(xiàng)
1線上線下、避免劇烈振動(dòng):以免損壞色譜柱發揮重要作用。
2、防止干燥:長期不使用時(shí)過程中,應(yīng)確保色譜柱內(nèi)充滿適當(dāng)?shù)娜軇┤ネ黄?,并封好兩端堵頭,以防止干燥和污染全面革新。
3作用、使用壽命:C18色譜柱的使用壽命大約為100~200次,當(dāng)輸出結(jié)果的峰形變得模糊行業分類、輸出穩(wěn)定性下降時(shí)技術特點,請及時(shí)更換新柱。
六發展邏輯、常見問題與解決方案
1凝聚力量、鹽析問題:在使用C18色譜柱時(shí)有所提升,可能會(huì)出現(xiàn)鹽析現(xiàn)象。這通常是由于流動(dòng)相中的鹽類物質(zhì)在色譜柱中析出所致新的力量。為了解決這個(gè)問題先進水平,可以采取優(yōu)化流動(dòng)相組成、使用耐高鹽的比例閥或加裝柱溫箱等措施全面展示。
2重要平臺、色譜柱堵塞:色譜柱堵塞是另一個(gè)常見問題。這可能是由于流動(dòng)相中的雜質(zhì)核心技術、樣品中的不溶性物質(zhì)或緩沖鹽類物質(zhì)在色譜柱中沉積所致應用提升。為了解決這個(gè)問題,可以采取使用高水相進(jìn)行沖洗創造性、使用保護(hù)柱或柱前過濾器等措施來防止堵塞的發(fā)生發展的關鍵。如果色譜柱已經(jīng)堵塞,可以嘗試使用反沖或超聲清洗等方法進(jìn)行恢復(fù)規模設備。但請注意真諦所在,柱芯和某些類型
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