定量PCR（Quantitative PCR競爭力，qPCR）是一種利用DNA聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)量化檢測(cè)目標(biāo)DNA數(shù)量的方法逐步改善。這種方法在醫(yī)學(xué)診斷、基因表達(dá)研究、遺傳學(xué)分析以及病毒滴定等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值進一步。

一、定義與原理

定量PCR旨在估算樣本中的原始模板數(shù)範圍。其原理基于PCR擴(kuò)增的規(guī)律性數字化，在PCR擴(kuò)增的指數(shù)期內(nèi)，通過(guò)測(cè)量擴(kuò)增產(chǎn)物的量來(lái)反推原始模板的數(shù)量優化程度。具體來(lái)說(shuō)積極性，如果知道擴(kuò)增的產(chǎn)物量N及PCR擴(kuò)增的效率e，便可以利用公式計(jì)算出原始模板No的值不斷豐富。

在實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time Fluorescent Quantitative PCR實施體系，F(xiàn)Q-PCR）中，還引入了熒光化學(xué)物質(zhì)各有優勢，隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行效果較好，熒光信號(hào)強(qiáng)度等比例增加。通過(guò)設(shè)定熒光閾值和測(cè)量循環(huán)閾值（CT值）持續，即熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)等多個領域，可以進(jìn)一步精確地計(jì)算出起始DNA模板的數(shù)量。

二高質量、實(shí)驗(yàn)步驟

定量PCR實(shí)驗(yàn)通常包括以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟：

1提供了有力支撐、準(zhǔn)備試劑：包括模板DNA、引物（前向引物和反向引物）前景、DNA聚合酶進一步意見、dNTP（四種脫氧核苷酸）、緩沖液和MgCl2等落到實處。

2服務水平、構(gòu)建反應(yīng)體系：將模板DNA、引物技術創新、DNA聚合酶處理方法、dNTP、緩沖液和MgCl2等混合持續向好，得到PCR反應(yīng)液習慣。

3、優(yōu)化PCR擴(kuò)增條件：調(diào)整溫度條件和PCR循環(huán)數(shù)進展情況，確保PCR反應(yīng)在最佳條件下進(jìn)行的積極性。

4、PCR擴(kuò)增：包括變性至關重要、退火和延伸三個(gè)步驟不久前，通過(guò)多次循環(huán)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)DNA的指數(shù)級(jí)擴(kuò)增用上了。

5、檢測(cè)PCR產(chǎn)物：可以通過(guò)凝膠電泳能力建設、熒光定量PCR或?qū)崟r(shí)定量PCR等方法進(jìn)行關註。實(shí)時(shí)定量PCR因其能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)進(jìn)程并準(zhǔn)確測(cè)量PCR產(chǎn)物數(shù)量而備受青睞。

三無障礙、技術(shù)特點(diǎn)

1連日來、高靈敏度：定量PCR能夠檢測(cè)到極低濃度的DNA模板，適用于微量樣本的分析發揮重要帶動作用。

2意向、高特異性：通過(guò)特異性引物的設(shè)計(jì)，可以確保PCR反應(yīng)只針對(duì)目標(biāo)DNA序列進(jìn)行擴(kuò)增文化價值。

3、定量準(zhǔn)確：結(jié)合熒光定量技術(shù)置之不顧，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)起始DNA模板數(shù)量的精確定量不斷完善。

4、應(yīng)用廣泛：在醫(yī)學(xué)診斷方便、基因表達(dá)研究基礎上、遺傳學(xué)分析以及病毒滴定等領(lǐng)域均有重要應(yīng)用。

四應用領域、應(yīng)用前景

隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展保持競爭優勢，定量PCR在科研和臨床中的應(yīng)用前景日益廣闊。特別是在病毒滴定方面相關性，qPCR技術(shù)以其快速完成的事情、敏感、污染概率低和可重復(fù)的特點(diǎn)穩定，已經(jīng)成為許多病毒檢測(cè)的首選方法改造層面。此外，在基因表達(dá)研究優勢與挑戰、遺傳學(xué)分析等領(lǐng)域經驗分享，定量PCR也發(fā)揮著不可替代的作用。

由上文可知定量PCR是一種重要的分子生物學(xué)技術(shù)趨勢，其在多個(gè)領(lǐng)域的應(yīng)用前景值得期待有力扭轉。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步和完善，相信定量PCR將在未來(lái)的科研和臨床工作中發(fā)揮更加重要的作用一站式服務。