Bradford 法是一種比色法（依靠顏色變化）蛋白質(zhì)定量方法同期。此方法的核心是 Coomassie 亮藍(lán) G-250 染料認為。這種染料在未結(jié)合狀態(tài)下呈紅褐色，在 465 nm波長(zhǎng)處吸收光能力和水平。然而示範，當(dāng)它主要透過(guò)精胺酸和離胺酸殘基與蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí)，染料的顏色會(huì)變成藍(lán)色重要工具，最大吸光度也會(huì)變成 595 nm積極拓展新的領域。這種顏色和吸光度的變化與蛋白質(zhì)濃度成正比，可用於定量更優質。

需要 Bradford 法的工作流程

蛋白質(zhì)純化

在每個(gè)純化步驟後相對開放，確定純化蛋白的濃度對(duì)於評(píng)估產(chǎn)量和純度至關(guān)重要。 Bradford法提供了一種快速可靠的蛋白質(zhì)定量方法脫穎而出，幫助研究人員判斷哪些組成需要合併拓展應用，並有助於評(píng)估純化過(guò)程的效率和成功率。

細(xì)胞裂解物製備

在將裂解液用於下游應(yīng)用之前結構，了解其蛋白質(zhì)濃度至關(guān)重要管理。這可以確保在不同樣品中使用等量的蛋白質(zhì)，從而得到一致且可比較的結(jié)果能力建設。 Bradford法通常用於確定這些裂解液中的總蛋白含量模樣。

SDS-PAGE 樣品製備

為了獲得準(zhǔn)確的結(jié)果，SDS-PAGE 凝膠中的每個(gè)孔洞都必須含有等量的蛋白質(zhì)服務。這可確保在比較各泳道的條帶時(shí)很重要，觀察到的任何差異都是由於實(shí)驗(yàn)條件而非負(fù)載量不均造成的。 Bradford法可用於調(diào)整樣本的蛋白質(zhì)濃度覆蓋，使每個(gè)孔中的蛋白質(zhì)含??量相等異常狀況。

Bradford 檢測(cè)方法

標(biāo)準(zhǔn)曲線法

這是最常見(jiàn)的方法，包括使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)（通常是牛血清白蛋白 (BSA) 或γ 球蛋白）繪製校準(zhǔn)曲線重要意義。

1. 準(zhǔn)備一系列標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)稀釋液統籌發展，以涵蓋樣本中蛋白質(zhì)濃度的預(yù)期範(fàn)圍。
2. 在每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)稀釋液中加入Bradford試劑並孵育一小段時(shí)間（通常為 5-10 分鐘）體系。
3. 使用分光光度計(jì)在 595 nm波長(zhǎng)處測(cè)量每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度生產製造。
4. 將吸光度值與已知蛋白質(zhì)濃度相對(duì)照，產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線攜手共進。
5. 測(cè)量未知樣品的吸光度共同，並根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定其蛋白質(zhì)濃度。

單點(diǎn)法

標(biāo)準(zhǔn)曲線法的快速替代方法高質量。它是利用單一已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)來(lái)估計(jì)未知樣本的蛋白質(zhì)濃度充分發揮。

1. 製備濃度在樣品預(yù)期範(fàn)圍內(nèi)的單一標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)。
2. 在標(biāo)準(zhǔn)樣品和未知樣品中加入Bradford試劑管理。
3. 測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)樣品和未知樣品的吸光度設計。
4. 利用吸光度與已知標(biāo)準(zhǔn)品濃度的比值計(jì)算未知樣品的蛋白質(zhì)濃度。

微孔板法

此方法將 Bradford 法改良為使用微孔板進(jìn)行高通量分析改進措施，可同時(shí)測(cè)定多個(gè)樣品就此掀開。

1. 將標(biāo)準(zhǔn)樣品和未知樣品移入微孔板的孔中。
2. 在每個(gè)孔中加入 Bradford 試劑今年。
3. 培養(yǎng)所需時(shí)間穩步前行。
4. 使用微孔板閱讀器在 595 nm波長(zhǎng)處測(cè)量各孔的吸光度。
5. 如果在微孔板格式中使用標(biāo)準(zhǔn)曲線法動手能力，則將標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值與其已知濃度相對(duì)照逐步改善，產(chǎn)生校正曲線。利用此曲線確定未知樣本的蛋白質(zhì)濃度提升。

與手動(dòng)移液相比大大提高，自動(dòng)化 Bradford 法的優(yōu)點(diǎn)：

• 一致性與重複性： 自動(dòng)化可減少人為誤差，使結(jié)果更一致研究成果。
• 高通量： 自動(dòng)化系統(tǒng)可同時(shí)處理多個(gè)樣本取得了一定進展，並提高了效率。
• 降低污染風(fēng)險(xiǎn)： 自動(dòng)化最大程度地降低了樣本間交叉污染的幾率首次。
• 資料記錄： 自動(dòng)化系統(tǒng)通常配有記錄資料的軟體可能性更大，從而更容易追蹤和分析結(jié)果。