簡介ELISA（酵素連結(jié)免疫吸附實(shí)驗(yàn)）是一種廣泛應(yīng)用於診斷和研究領(lǐng)域的重要測試方法性能。在這項(xiàng)技術(shù)中是目前主流，確保樣本處理的一致性至關(guān)重要，而減少人工操作時間則可以有效降低人為誤差適應性強。我們利用Opentrons OT-2 和 Flex 液體處理工作站保供，開發(fā)並測試了多種自動化協(xié)定體製。透過這些自動化協(xié)議，您可以直接使用 ELISA 試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，也可以根據(jù)需要自訂特定的實(shí)驗(yàn)流程近年來。

方法

試劑盒: Takara Fibronectin (FN) EIA Kit（夾心法ELISA講道理，圖1）

• 儀器: Opentrons OT-2
• 工作流程:

1. 加樣（靶向捕獲）
2. 洗滌
3. 加酶標(biāo)抗體
4. 洗滌
5. 加顯色底物

檢測方法: Tecan Cortisol Saliva ELISA Kit（競爭法ELISA，圖2）

• 儀器: Opentrons OT-2
• 工作流程:

1. 加樣（靶向捕獲）&標(biāo)記抗原
2. 洗滌
3. 加顯色底物

• 檢測方法: Cell Sciences SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit
  （競爭法ELISA技術先進，圖3）
• 儀器: Opentrons OT-2
• 工作流程:

1. 加樣（靶向捕獲） & 標(biāo)記ACE2
2. 洗滌
3. 加顯色底物

• 檢測方法: SARS-CoV-2 Spike RBD-coupled Magnetic Beads
  (磁珠式ELISA, 圖4)
• 儀器: Opentrons OT-2 & 磁力架模組
• 工作流程:

1. 加樣（靶向捕獲）
2. 洗滌
3. 加酶標(biāo)抗體
4. 洗滌
5. 加顯色底物

檢測：細(xì)胞激素檢測的測定方法開發(fā)（夾心法ELISA更多的合作機會，圖5 ）儀器: Opentrons Flex工作流程:1 .ELISA 板準(zhǔn)備2.洗滌3.加樣（靶向捕獲）4.洗滌5.加酶標(biāo)抗體6.洗滌7.加底物顯色

結(jié)果

圖 6. Takara Fibronectin (FN) EIA Kit（圖 1 ）。對FN樣品進(jìn)行梯度稀釋並檢驗(yàn)認為，檢驗(yàn)結(jié)果如圖所示:左圖為FN樣品濃度和平均吸光度（n=3）數(shù)據(jù)服務好，呈現(xiàn)高度線性迴歸；右圖為3次重複實(shí)驗(yàn)結(jié)果反應能力，呈現(xiàn)良好的重複性和穩(wěn)定性共謀發展。

圖 7. Tecan Cortisol Saliva ELISA Kit （圖 2 ）。皮質(zhì)醇樣本進(jìn)行梯度稀釋並檢驗(yàn)結構重塑，檢驗(yàn)結(jié)果如圖所示：左圖為皮質(zhì)醇樣本濃度與平均吸光度（n=3）數(shù)據(jù)聽得懂，呈現(xiàn)高度線性迴歸；右圖為3次重複實(shí)驗(yàn)結(jié)果高質量發展，呈現(xiàn)良好的重複性和穩(wěn)定性全方位。

圖 8. Cell Sciences SARS-CoV-2 Surrogate（圖 3 ）。檢定結(jié)果表明影響力範圍，陽性的人血清樣本（先前已通過FDA 認(rèn)證的ELISA 實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果為陽性）大局，在該測試中呈現(xiàn)結(jié)果為陽性（抑制率>20%，計(jì)算公式：抑制率= [1 - (樣本的OD450值/ 陰性對照的OD值)] x 100% 邁出了重要的一步，n = 3）有序推進。

圖 9. SARS-CoV-2 Spike RBD-coupled Magnetic Beads（圖 4 ）。對重組中和抗體樣本進(jìn)行梯度稀釋並檢驗(yàn)需求。檢定結(jié)果表明道路，陽性的人血清樣本（先前已通過 FDA 認(rèn)證的 ELISA 實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果為陽性），在該測試中呈現(xiàn)結(jié)果為陽性（n = 3）（右）多種方式。

圖 10. Assay Development for Cytokine Detection（圖 5 ）。在 96 孔板塗覆抗 TNF-alpha抗體和抗IFN-gamma抗體技術創新，對含有細(xì)胞激素的樣本進(jìn)行ELISA檢測深入交流研討，數(shù)據(jù)如圖所示（n=6）。

結(jié)論

• 此工作站可用於執(zhí)行從加抗體/抗原到加顯色底物的完整 ELISA 流程
• 結(jié)果表明樣本處理的一致性高（變異系數(shù)<10%）廣泛應用、準(zhǔn)確性高（R-squared>0.99）關註度，重復(fù)性
  好。
• 以 SARS-CoV-2 抗體檢測為例哪些領域，基于 96 孔板的商用試劑和基于磁珠的自制 ELISA 試劑均可
  實(shí)現(xiàn)全自動化處理敢於挑戰，且結(jié)果與 FDA 認(rèn)證的 Elisa 方法測定結(jié)果一致。