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第二代定序技術(shù),作為基因組學(xué)研究領(lǐng)域的革命性飛躍深入開展,其原理與特徵深刻地重塑了我們對遺傳訊息的理解與應(yīng)用先進的解決方案。第二代定序(Next-generation sequencing, NGS)的原理與特性可以詳細(xì)說明如下:
一生產能力、第二代定序的原理
第二代定序技術(shù)主要基於邊合成邊定序(Sequencing by Synthesis, SBS)的原理。這種定序方法透過捕捉新添加的鹼基所攜帶的特殊標(biāo)記來確定DNA序列。具體來說影響,在定序過程中,會在DNA模板鏈中加入經(jīng)過特殊改造的DNA聚合酶和帶有可逆終止螢光標(biāo)記的dNTP(脫氧核糖核苷三磷酸)的過程中。這些dNTP的每個鹼基都連接有一個不同的螢光基團(tuán)發展契機,並且它們的3'羥基被修飾,使得每次只能加入一個鹼基促進進步。當(dāng)DNA聚合酶催化加入一個dNTP時發力,螢光基團(tuán)會發(fā)出特定顏色的光,從而被檢測器捕獲並記錄迎來新的篇章。隨後共創美好,以化學(xué)方法去除螢光基團(tuán)和阻止鏈延伸的基團(tuán),恢復(fù)3'羥基的活性薄弱點,進(jìn)行下一輪定序反應(yīng)覆蓋範圍。
二、第二代定序的特點
1.高通量:NGS能夠同時處理數(shù)百萬到數(shù)十億個DNA片段積極性,大大提高了定序的通量和效率奮勇向前。這使得在短時間內(nèi)對大量樣本進(jìn)行定序成為可能,加速了基因組學(xué)約定管轄、轉(zhuǎn)錄組學(xué)等領(lǐng)域的研究過程數據。
2.高靈敏度:NGS技術(shù)能夠偵測到極低濃度的DNA或RNA分子創新的技術,甚至能區(qū)分單一分子之間的差異。這使得它在遺傳疾病診斷顯著、腫瘤早期檢測等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景快速增長。
3.讀長短:雖然NGS的通量很高,但其單次定序的讀長相對較短(一般為數(shù)十到幾百個鹼基對)占。這意味著在定序完整基因組或轉(zhuǎn)錄組時高質量,需要將DNA或RNA片段打斷成較小的片段進(jìn)行定序,並在定序完成後進(jìn)行拼接供給。因此的方法,NGS資料的準(zhǔn)確性和完整性在很大程度上取決於拼接演算法和參數(shù)的設(shè)定。
4.成本低:相較於傳統(tǒng)的一代定序技術(shù)(如Sanger測序)進行探討,NGS大大降低了定序成本落到實處。這使得大規(guī)模基因組定序最新、轉(zhuǎn)錄組定序等研究變得更經(jīng)濟(jì)可行技術創新。
5.多樣化平臺:目前市場上有許多基於不同原理的NGS平臺,如Illumina的HiSeq和MiSeq系列重要作用、Thermo Fisher Scientific的Ion Torrent系列以及Oxford Nanopore Technologies的MinION等持續向好。這些平臺各有優(yōu)缺點,適用於不同的研究需求和應(yīng)用情境充足。
第二代定序技術(shù)是基於邊合成邊定序的巧妙原理進展情況,不僅簡化了定序流程,更大幅提升了定序的通量與效率綠色化發展,為基因體學(xué)至關重要、轉(zhuǎn)錄組學(xué)等領(lǐng)域的研究提供了前所未有的數(shù)據(jù)支持。
第二代定序技術(shù)的特點左右,則進(jìn)一步鞏固了其在生命科學(xué)領(lǐng)域的核心地位背景下。高通量、高靈敏度可靠保障、成本效益比的不斷優(yōu)化自然條件,以及多樣化平臺的不斷湧現(xiàn),共同建構(gòu)了一個強大且靈活的定序生態(tài)系統(tǒng)開展。
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