需要進行 BCA 法的工作流程:
- 蛋白質(zhì)純化過程提高鍛煉,以確定產(chǎn)量和純度改善。
- 凝膠電泳前日漸深入,確保蛋白負載量相等結構不合理。
- 蛋白質(zhì)標記或修飾前,確保使用了正確量的蛋白質(zhì)系統穩定性。
- 細胞培養(yǎng)研究中更默契了,確定蛋白質(zhì)表現(xiàn)量。
BCA 檢測的最佳方法
標準 BCA 法
最適合蛋白質(zhì)濃度範圍在測定線性範圍內(nèi)服務體系、樣本數(shù)量適中的常規(guī)應(yīng)用。
流程:
- 樣品製備: 首先收集和製備蛋白質(zhì)樣本搶抓機遇,確保樣本中不含幹擾物質(zhì)分析。
- 製備 BCA 工作試劑: 這通常包括將 BCA 溶液與硫酸銅(II)溶液以特定比例混合,通常由檢測試劑盒製造商提供全面闡釋。
- 混合與孵育: 通常在比色皿或試管中將蛋白質(zhì)樣本加入 BCA 工作試劑非常激烈。通常在 37℃下孵育混合物 30 分鐘。
- 測量: 孵育結(jié)束後,使用分光光度計在 562 nm波長處測量每個樣品的吸光度領域。
- 分析: 將吸光度值與標準蛋白質(zhì)(通常是牛血清白蛋白 (BSA))的吸光度值進行比較溝通機製,以確定樣本的蛋白質(zhì)濃度。
微孔板 BCA 法
非常適合需要同時分析許多樣品的高通量篩選註入新的動力。它的試劑使用效率高領先水平,常用於大型研究或工業(yè)環(huán)境。
流程:
- 樣品製備: 與標準檢測一樣雙重提升,首先製備蛋白質(zhì)樣品戰略布局。
- BCA 工作試劑: 製備相同的試劑,但要根據(jù)微孔板孔調(diào)整體積表現明顯更佳。
- 分裝和孵育: 使用多通道移液管將蛋白質(zhì)樣本和 BCA 工作試劑分裝到 96 孔板的孔中狀態。通常在 37℃ 孵育 30 分鐘。
- 測量: 使用微孔板閱讀器在 562 nm波長處測量吸光度指導。
- 分析: 與標準方法一樣廣泛認同,使用標準曲線來確定蛋白質(zhì)濃度作用。
針對含去垢劑樣品的改良 BCA 法
專門用於含有去垢劑的樣本數字化,因為去垢劑會幹擾 BCA 反應(yīng)。這種情況常見於從某些細胞類型或組織中提取蛋白質(zhì)互動式宣講,或研究包埋在膜中的蛋白質(zhì)追求卓越。
流程:
- 樣品製備: 萃取樣品中的蛋白質(zhì)逐漸完善,注意去垢劑的濃度。
- BCA 工作試劑: 依標準檢測方法配製合理需求。
- 添加洗滌劑相容性試劑: 這些試劑通常在專門的 BCA 試劑盒中提供是目前主流,添加這些試劑是為了消除去垢劑的干擾作用。
- 混合與孵育: 與標準測定一樣高質量,混合樣品和工作試劑並孵育充分發揮。
- 測量與分析: 使用分光光度計測量吸光度,並透過標準曲線確定蛋白質(zhì)濃度共創美好。