需要免疫沉澱的工作流程

• 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)交互作用研究：鑒定和驗(yàn)證與相關(guān)蛋白質(zhì)相互作用的蛋白質(zhì)積極影響。
• 翻譯後修飾分析：富集具有特定修飾（如磷酸化或泛素化）的蛋白質(zhì)越來越重要。
• 功能測(cè)定：在受控環(huán)境中研究蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)複合物的活性發揮重要作用。

免疫沉澱的最佳方法

免疫沉澱（Classic Immunoprecipitation, Classic IP）

從複雜混合物中分離出特定蛋白質(zhì)高質量，用於研究其特性、翻譯後修飾或進(jìn)一步分析重要的作用。

1. 使用裂解緩衝液裂解細(xì)胞以釋放蛋白質(zhì)足夠的實力。
2. 將針對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)量身定制的特異性抗體附著在珠子（瓊脂糖或磁性）上更適合。
3. 細(xì)胞裂解液與抗體-磁珠複合物孵育，使目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合深度。
4. 使用洗滌緩衝液洗去非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)開拓創新。
5. 然後使用洗脫緩衝液將目標(biāo)蛋白質(zhì)從珠子上洗脫下來(lái)極致用戶體驗。
6. 使用離心機(jī)或磁力架從裂解液中分離出與抗體珠結(jié)合的蛋白質(zhì)多樣性。

免疫共沉澱（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）

從複雜的生物樣本中分離出主要蛋白質(zhì)及其潛在的相互作用夥伴，從而研究蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間的相互作用安全鏈。

1. 細(xì)胞裂解以釋放蛋白質(zhì)充分。
2. 將針對(duì)原生蛋白量身訂製的特異性抗體附著在珠子上。
3. 細(xì)胞裂解液與抗體-珠子複合物一起孵育調整推進。
4. 在此步驟中機製性梗阻，與原生蛋白相互作用的蛋白質(zhì)會(huì)發(fā)生共沉澱。
5. 非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)會(huì)被洗去探討。
6. 原生蛋白及其相互作用蛋白被洗脫調解製度。
7. 使用離心機(jī)或磁力架分離與抗體珠結(jié)合的蛋白質(zhì)創新內容。

串聯(lián)親和純化 (Tandem Affinity Purification, TAP)

實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)複合物的高純度純化善於監督，尤其適用於研究低豐度或瞬時(shí)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用更合理。

1. 對(duì)感興趣的蛋白質(zhì)進(jìn)行基因改造各方面，使其包含雙標(biāo)記系統(tǒng)適應性。
2. 對(duì)錶達(dá)這種修飾蛋白的細(xì)胞進(jìn)行裂解。
3. 首先將裂解液與與第一個(gè)標(biāo)籤結(jié)合的珠子孵育等地，分離出蛋白質(zhì)規定。
4. 使用特定的蛋白酶將第一個(gè)標(biāo)籤裂解掉進行部署。
5. 使用與第二個(gè)標(biāo)籤結(jié)合的珠子進(jìn)行第二輪純化保護好。
6. 經(jīng)過(guò)這步驟後系列，蛋白質(zhì)複合物被洗脫出來(lái)相互配合，純度很高。
7. 使用離心機(jī)分離與珠子結(jié)合的蛋白質(zhì)科技實力。

為什麼免疫沉澱很困難：

• 特異性問(wèn)題： 蛋白質(zhì)與珠子或抗體的非特異性結(jié)合會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性在此基礎上。
• 靈敏度問(wèn)題： 低豐度蛋白質(zhì)可能無(wú)法有效吸附自主研發，導(dǎo)致假陰性損耗。
• 維持蛋白質(zhì)相互作用： 有些蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間的相互作用是瞬時(shí)或微弱的性能穩定，因此在 IP 過(guò)程中捕獲並維持這種作用具有挑戰(zhàn)性情況正常。

如何實(shí)現(xiàn)免疫沉澱過(guò)程的自動(dòng)化：

• 液體處理工作站： 這些工作站可自動(dòng)添加和移除溶液共謀發展，確保移液的一致性和精確度結構重塑。
• 磁珠分離： 自動(dòng)化平臺(tái)可處理磁珠分離高質量發展，減少操作時(shí)間並提高一致性影響力範圍。
• 整合系統(tǒng)： 有些平臺(tái)將樣品製備邁出了重要的一步、IP 和下游分析（如質(zhì)譜）整合到一個(gè)工作流程中需求。

免疫沉澱自動(dòng)化比手動(dòng)移液的優(yōu)勢(shì)：

• 一致性和可重複性： 自動(dòng)化減少了人為錯(cuò)誤和可變性。
• 通量： 自動(dòng)化系統(tǒng)可同時(shí)處理多個(gè)樣品積極，提高效率集聚。
• 降低污染風(fēng)險(xiǎn)：盡量減少人工操作狀況，降低樣品污染的幾率全過程。
• 最佳化方案： 自動(dòng)化系統(tǒng)通常有最佳化的操作程序大型，可確保最佳結(jié)果明確相關要求。