摘要檢測(cè)SARS-CoV-2中和抗體的可靠血清學(xué)檢測(cè)是公共衛(wèi)生和臨床目的的有用工具振奮起來。用於檢測(cè)中和抗體的酵素連結(jié)免疫吸附試驗(yàn)（ELISAs）已從FDA頒發(fā)了緊急使用授權(quán)（EUA）品質。除了傳統(tǒng)的elisa抗體（如RBD）抗原偶聯(lián)磁珠基elisa被固定在96孔板的表面，已成為具有幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)的替代方法深入各系統。我們有開發(fā)了一種基於珠子的ELISA解決問題，用於檢測(cè)SARS-CoV-2中和抗體。這種方法需要單獨(dú)的儀器來執(zhí)行主要步驟作用，如液體轉(zhuǎn)移相互配合，清洗和搖晃。在OT-2平臺(tái)上簡(jiǎn)化了該實(shí)驗(yàn)磁模組和加熱器搖振器方案，一個(gè)協(xié)議設(shè)計(jì)和檢測(cè)關鍵技術，以處理收集自COVID-19患者的血清樣本。從ACROBio系統(tǒng)公司獲得的RBD偶聯(lián)磁珠也進(jìn)行了測(cè)試並對(duì)使用相同的協(xié)議進(jìn)行了比較深入。

主要調(diào)查結(jié)果配備了磁性模組和加熱震器模組的OT-2展示了對(duì)SARS-CoV-2進(jìn)行珠狀elisa的能力中和性抗體檢測(cè)精度較高技術研究。在更高的吞吐量設(shè)定中，該協(xié)議可以用最少的動(dòng)手時(shí)間處理多達(dá)96個(gè)樣品開展研究。

介紹例如姿勢，在識(shí)別出病毒成分後，細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)會(huì)觸發(fā)針對(duì)病毒抗原的中和抗體的分泌存在核衣殼(N)蛋白和刺突(S)蛋白治療嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合徵冠狀病毒2（SARS-CoV-2）首要任務【G色化？贵w檢測(cè)可用於檢測(cè)由於病毒感染而導(dǎo)致的血清中這些中和抗體的存在，提供解決人群或過去SARS-CoV-2感染的信息先進的解決方案，以更好地了解SARS-CoV-2的流行病學(xué)拓展。這些測(cè)試是在臨床試驗(yàn)中確定疫苗效力的常用工具以及在大規(guī)模接種疫苗之後⌒v活動？贵w測(cè)試通常使用酶印免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）不斷進步，一種技術(shù)它可以檢測(cè)和量化目標(biāo)分子抗體)通過高度特異性的抗體-抗原相互作用。對(duì)於一個(gè)典型的夾層ELISA用於抗體檢測(cè)效率，第一步是將SARS-CoV-2抗原附著在固體表面96孔或12孔的條紋規模，它們可以組裝在一個(gè)與96孔酶標(biāo)儀相容的框架上。然後這些樣本被添加到井中講道理，以及抗sars-CoV-2抗體透過與抗原結(jié)合而捕獲並固定發展目標奮鬥。檢測(cè)抗體，通常是一種能識(shí)別人類IgG並攜帶辣根的抗體使用過氧化物酶（HRP）更多的合作機會，並在酶的底物的存在下延伸，產(chǎn)生一個(gè)比色信號(hào)並且可以被測(cè)量和量化。吸光度與樣本中抗sars-cov-2中和抗體的含量成正比服務好⌒纶厔?；蛘叻磻芰?，磁珠也可以作為elisa中的固體表面。其優(yōu)點(diǎn)包括一個(gè)增加的在整個(gè)樣品處理過程中學習，可用的表面積和珠子的均勻分佈結構重塑，可以實(shí)現(xiàn)更快速和靈敏的檢測(cè)低分析物濃度。我們開發(fā)了一種基於珠子的ELISA應用優勢，用於檢測(cè)SARS-CoV-2病毒的中和抗體高質量發展。此檢測(cè)方法利用了SARS-CoV-2的受體結(jié)合域（RBD）S蛋白作為捕獲抗原，賽默費(fèi)雪herDynabeads（沃爾瑟姆緊密相關，MA更默契了，USA）作為固體表面。儘管檢測(cè)設(shè)計(jì)多樣共同學習，elisa通常遵循類似的工作流程順滑地配合。一般步驟包括試劑轉(zhuǎn)移、孵育和重複洗滌效高∏把丶夹g；吨榈膃lisa程式需要單獨(dú)的儀器來執(zhí)行這些步驟，這可能在Opentrons OT-2平臺(tái)上自動(dòng)化磁性模組和加熱器振動(dòng)器性能。我們開發(fā)了一個(gè)簡(jiǎn)化檢測(cè)方案多種方式，以避免多種儀器的需要，並減少實(shí)際操作時(shí)間技術創新。此方案也使用ACROBio系統(tǒng)公司的RBD偶軛磁珠（Newark深入交流研討，DE，USA）進(jìn)行驗(yàn)證廣泛應用，以確認(rèn)OT-2樣品處理的品質(zhì)關註度。

材料與方法在視中心OT-2上測(cè)試的ELISA示意圖，完成分析的步驟大綱哪些領域，以及甲板佈置圖（圖1）將60 μg SARS-CoV-S-2S蛋白his標(biāo)記RBD結(jié)合製備RBD偶聯(lián)珠（ acro生物系統(tǒng)公司敢於挑戰，紐瓦克，DE建立和完善，美國(guó)）至5毫克迪納比德（賽默費(fèi)舍爾提供了遵循，沃爾瑟姆，馬薩諸塞州大型，美國(guó)）服務效率，超順磁性球形聚合物粒子為磁分離生物材料，然後儲(chǔ)存在2.5 mL的封閉緩衝液中重要意義。相同的協(xié)議也是透過使用市售的RBD進(jìn)行測(cè)試的嗎美國(guó)生物系統(tǒng)的預(yù)塗層珠(36 μg RBD每毫克珠子）統籌發展。人類抗sars-cov-2S1抗體作為標(biāo)準(zhǔn)抗體和小鼠單株抗人抗體以HRP偶聯(lián)作為檢測(cè)抗體的IgG Fc購自細(xì)胞科學(xué)公司（紐伯里波特，MA體系，美國(guó)）和Abcam公司（劍橋創新科技，英國(guó)）服務延伸，定制的檢測(cè)緩衝液分別由. 特諾瓦（霍利斯特，加利福尼亞州具有重要意義，美國(guó)）。液體轉(zhuǎn)移由8通道移液管進(jìn)行高效。 ELISA板被放置在磁模組上應用創新，並手動(dòng)移動(dòng)到加熱器模組如果需要攪拌。本研究獲得了先前檢測(cè)為SARS-CoV-2抗體陽性或陰性的血清樣本機構。實(shí)驗(yàn)完成後的特性，立即以比色平板儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定每個(gè)樣品的吸光度。的運(yùn)行時(shí)對(duì)不同樣本量下的每種檢測(cè)方法進(jìn)行了估計(jì)（表1）基礎。

結(jié)果為了產(chǎn)生測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)曲線提供堅實支撐，在OT-2上，用50 μL的RBD偶聯(lián)珠子懸液進(jìn)行檢測(cè)轉(zhuǎn)移到96孔2 mL深孔板的每個(gè)孔中高產，預(yù)先裝有連續(xù)2倍稀釋的人抗-SARS-CoV-2 S1抗體信息化技術，檢測(cè)方法見材料與方法。測(cè)量了吸光度良好，並進(jìn)行了劑量反應(yīng)曲線繪製逐步顯現。結(jié)果表明，OT-2進(jìn)行該檢測(cè)的精度（CV<10%）（圖2A），並且在100 ng/mL到ng/mL之間的檢測(cè)讀數(shù)與抗體濃度之間存在極好的線性關(guān)聯(lián)12.5 ng /mL（r平方>0.99）（圖2B）。

來自宏宏生物系統(tǒng)的RBD預(yù)塗層珠然後重組（每mL阻斷緩衝液1mg珠子）特點，並在OT-2上使用相同的方案進(jìn)行測(cè)試可靠保障。製備連續(xù)2倍稀釋的人類抗sars-cov-2S1抗體，並暴露於20 μL麵包懸浮液中講理論。這些數(shù)據(jù)被用於繪製劑量-反應(yīng)曲線，以便進(jìn)一步分析。 OT-2上樣品處理的一致性（CV<10%）（圖3A）和檢測(cè)讀數(shù)與抗體濃度的線性關(guān)係均得到了證實(shí)（100 ng/mL至6.25 ng/mL可能性更大，r平方>0.99）（圖3B）。

為了進(jìn)行基於珠子的ELISA方案，以確定SARS-CoV-2 S1中和抗體的水平關鍵技術，該方案設(shè)計(jì)用於RBD偶聯(lián)珠子的製備房子或美國(guó)生物系統(tǒng)公司的RBD共軛麵包是用於處理之前由傳統(tǒng)的、fda認(rèn)證的ELISA檢測(cè)的血清樣本（陽性： *）深入。結(jié)果再次顯示了OT-2液體處理的精確度（CV <為10%）和抗體濃度根據(jù)圖4所示的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到技術研究。

對(duì)OT-2抗體的抗體中和試驗(yàn)

在OT-2上的基於珠子的ELISA

結(jié)論基於珠的elisa可以在配備磁模組和的OT-2平臺(tái)上成功進(jìn)行加熱器振動(dòng)器模組模式。結(jié)果顯示優(yōu)良的樣品處理質(zhì)量，該方案適合處理最少的多達(dá)96個(gè)樣品實(shí)際操作時(shí)間提升。