簡介ELISA（酵素連結(jié)免疫吸附實驗）是一種廣泛應(yīng)用於診斷和研究領(lǐng)域的重要測試方法。在這項技術(shù)中影響力範圍，確保樣本處理的一致性至關(guān)重要搖籃，而減少人工操作時間則可以有效降低人為誤差效果。我們利用Opentrons OT-2 和 Flex 液體處理工作站科普活動，開發(fā)並測試了多種自動化協(xié)定多元化服務體系。透過這些自動化協(xié)議深入闡釋，您可以直接使用 ELISA 試劑盒進行實驗相關性，也可以根據(jù)需要自訂特定的實驗流程。

方法

試劑盒: Takara Fibronectin (FN) EIA Kit（夾心法ELISA物聯與互聯，圖1）

• 儀器: Opentrons OT-2
• 工作流程:

1. 加樣（靶向捕獲）
2. 洗滌
3. 加酶標(biāo)抗體
4. 洗滌
5. 加顯色底物

檢測方法: Tecan Cortisol Saliva ELISA Kit（競爭法ELISA穩定，圖2）

• 儀器: Opentrons OT-2
• 工作流程:

1. 加樣（靶向捕獲）&標(biāo)記抗原
2. 洗滌
3. 加顯色底物

• 檢測方法: Cell Sciences SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralization Test Kit
  （競爭法ELISA，圖3）
• 儀器: Opentrons OT-2
• 工作流程:

1. 加樣（靶向捕獲） & 標(biāo)記ACE2
2. 洗滌
3. 加顯色底物

• 檢測方法: SARS-CoV-2 Spike RBD-coupled Magnetic Beads
  (磁珠式ELISA, 圖4)
• 儀器: Opentrons OT-2 & 磁力架模組
• 工作流程:

1. 加樣（靶向捕獲）
2. 洗滌
3. 加酶標(biāo)抗體
4. 洗滌
5. 加顯色底物

檢測：細(xì)胞激素檢測的測定方法開發(fā)（夾心法ELISA供給，圖5 ）儀器: Opentrons Flex工作流程:1 .ELISA 板準(zhǔn)備2.洗滌3.加樣（靶向捕獲）4.洗滌5.加酶標(biāo)抗體6.洗滌7.加底物顯色

結(jié)果

圖 6. Takara Fibronectin (FN) EIA Kit（圖 1 ）優勢與挑戰。對FN樣品進行梯度稀釋並檢驗，檢驗結(jié)果如圖所示:左圖為FN樣品濃度和平均吸光度（n=3）數(shù)據(jù)解決方案，呈現(xiàn)高度線性迴歸趨勢；右圖為3次重複實驗結(jié)果，呈現(xiàn)良好的重複性和穩(wěn)定性上高質量。

圖 7. Tecan Cortisol Saliva ELISA Kit （圖 2 ）一站式服務。皮質(zhì)醇樣本進行梯度稀釋並檢驗，檢驗結(jié)果如圖所示：左圖為皮質(zhì)醇樣本濃度與平均吸光度（n=3）數(shù)據(jù)深入交流，呈現(xiàn)高度線性迴歸引領作用；右圖為3次重複實驗結(jié)果，呈現(xiàn)良好的重複性和穩(wěn)定性處理。

圖 8. Cell Sciences SARS-CoV-2 Surrogate（圖 3 ）建設。檢定結(jié)果表明，陽性的人血清樣本（先前已通過FDA 認(rèn)證的ELISA 實驗檢測結(jié)果為陽性）助力各行，在該測試中呈現(xiàn)結(jié)果為陽性（抑制率>20%前來體驗，計算公式：抑制率= [1 - (樣本的OD450值/ 陰性對照的OD值)] x 100% ，n = 3）確定性。

圖 9. SARS-CoV-2 Spike RBD-coupled Magnetic Beads（圖 4 ）更加廣闊。對重組中和抗體樣本進行梯度稀釋並檢驗。檢定結(jié)果表明相貫通，陽性的人血清樣本（先前已通過 FDA 認(rèn)證的 ELISA 實驗檢測結(jié)果為陽性）不斷發展，在該測試中呈現(xiàn)結(jié)果為陽性（n = 3）（右）積極影響。

圖 10. Assay Development for Cytokine Detection（圖 5 ）。在 96 孔板塗覆抗 TNF-alpha抗體和抗IFN-gamma抗體緊密協作，對含有細(xì)胞激素的樣本進行ELISA檢測越來越重要，數(shù)據(jù)如圖所示（n=6）。

結(jié)論

• 此工作站可用於執(zhí)行從加抗體/抗原到加顯色底物的完整 ELISA 流程
• 結(jié)果表明樣本處理的一致性高（變異系數(shù)<10%）發揮重要作用、準(zhǔn)確性高（R-squared>0.99）醒悟，重復(fù)性
  好。
• 以 SARS-CoV-2 抗體檢測為例高質量，基于 96 孔板的商用試劑和基于磁珠的自制 ELISA 試劑均可
  實現(xiàn)全自動化處理也逐步提升，且結(jié)果與 FDA 認(rèn)證的 Elisa 方法測定結(jié)果一致。