測(cè)定OT-2上THP-1細(xì)胞中過氧化氫水平的自動(dòng)化分析

瓦蘇達(dá)SNair博士.1金納裡·沃森博士11.Optrins實(shí)驗(yàn)室公司調解製度。

介紹

沙桂油過氧化氫（H2O2)主要與細(xì)胞損傷有關(guān)應用；然而，重新生成百美分的研究表明像一棵樹，細(xì)胞釋放低水平的H2O2作為正常細(xì)胞間的一部分高頻率多路通信過氧化氫的轉(zhuǎn)運(yùn)、攝取和釋放的機(jī)制生物學(xué)效應(yīng)目前還不為人所知開展研究，但對(duì)癌癥力度、幹細(xì)胞有重要意義細(xì)胞和老化。雙聯(lián)體紅色試劑是非螢光的基於10-乙醯3,7二羥基苯氧惡嗪的氧化新趨勢，測(cè)定原理簡(jiǎn)單它是由辣根過氧化物酶（HRP）催化的反應能力，在H2O2產(chǎn)生一個(gè)紅色螢光產(chǎn)物，間苯二酚學習，化學(xué)計(jì)量比為1：1奮戰不懈。樹脂最終產(chǎn)物具有較高的消光係數(shù)這是一種超靈敏的檢測(cè)方法，只有10皮摩爾的H2O2在一個(gè)100 μL的捲中措施；1×10–5U/mL的HRP大大縮短。這些讀數(shù)可以用分光光度法測(cè)量要落實好，也可以用螢光讀數(shù)法測(cè)量使用酶標(biāo)儀，激發(fā)530 nm更默契了，發(fā)射波590 nm先進技術。

材料與方法

OT-2，P300單GEN2移液管不合理波動，P20單GEN2移液管溫度模組設(shè)定為23°C宣講手段，在協(xié)議結(jié)束時(shí)設(shè)定為37°C。 THP-1巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞（ATCC積極拓展新的領域，Manassas配套設備，VA，USA）(No相對開放。TIB-202)無(wú)酚紅RPMI 1640培養(yǎng)基（熱費(fèi)雪科學(xué)11835030）佛波12-肉荳蔻酸13-醋酸酯（ PMA）（Sigma Aldrich P1585-1MG）胎牛血清（胎牛血清）未熱滅活（ATCC推進高水平，Cat No. 30-2020）Amplex紅色檢測(cè)試劑盒(Cat No.A22188)，包括a) 5X反應(yīng)緩衝液b) HRP c) DMSO d) Amplex紅色試劑e) 3% H2O2a)視中心96過濾器尖端架200μL b) 96過濾器尖端架20μL c)視中心10管架與獵鷹4 x 50 mL拓展應用，6 x15mL錐形d)視中心24管架與埃彭多夫1.5 mL安全鎖扣帽（兩）

結(jié)論

OT-2可以進(jìn)行測(cè)定H的自動(dòng)化測(cè)定2O2在THP-1細(xì)胞OT-2可以以96孔的格式處理中等到高通量的樣本數(shù)量OT-2可以模擬人工協(xié)議而不損失時(shí)間和高度可重複性

討論

本研究是為了了解像Amplex Red這樣自動(dòng)偵測(cè)H的可行性2O2在OT-2參與水平。 H2O2被證明是一種重要的訊號(hào)分子，負(fù)責(zé)代謝活性和幫助補(bǔ)酶激活服務效率，可以影響細(xì)胞形態(tài)明確相關要求，並在生長(zhǎng)因子的存在下導(dǎo)致增殖。細(xì)胞外的H2O2這裡使用的細(xì)胞係是人類單核細(xì)胞統籌發展，THP-1深化涉外。結(jié)果表明，H可能依賴於濃度2O2不同PMA環(huán)境中的生產(chǎn)速率逐漸完善。 H的關(guān)係2O2釋放速率和PMA濃度可能是在10,25 ng/mL時(shí)比基礎(chǔ)速率顯著增加之後參與能力。 OT-2已成功用於NGS、IP中的各種實(shí)驗(yàn)協(xié)議的自動(dòng)化是目前主流，從而簡(jiǎn)化了標(biāo)準(zhǔn)試劑盒和分析協(xié)議的使用充分發揮，可以手動(dòng)勞動(dòng)密集。透過自動(dòng)化分析步驟，與手動(dòng)方案相比選擇適用，觀察到一致的檢測(cè)效能管理。此外，這也描述了量化過氧化物/過氧化物酶的人工和人工方案之間的移液效率業務指導。該協(xié)議能夠給用戶一個(gè)小時(shí)的實(shí)踐時(shí)間11分鐘改進措施，如果需要檢測(cè)多個(gè)不同細(xì)胞類型的96孔板，以檢測(cè)添加或不添加各種興奮劑或生長(zhǎng)因子的過氧化氫水平長足發展，這可能是一種有效的方法今年。

原文網(wǎng)址：OT-2 海報(bào)上THP-1 細(xì)胞過氧化氫水平的自動(dòng)測(cè)定