1 引言鑑於對資料可靠性的顧慮利用好，以及無法重現(xiàn)已發(fā)布的研究結(jié)果，生命科學(xué)正陷於「重現(xiàn)性危機(jī)」之中創造性。大多數(shù)科學(xué)研究人員報告未能重現(xiàn)實驗（包括其本人的實驗）發展的關鍵，因此需要採取更多步驟來改善已發(fā)布的研究結(jié)果的可靠性與可信度。但是規模設備，有哪些因素導(dǎo)致了這種科學(xué)“危機(jī)”真諦所在，應(yīng)如何實施簡單的移液解決方案來應(yīng)對這一危機(jī)指導？本白皮書概述了重現(xiàn)性危機(jī)的嚴(yán)重程度，探討了造成實驗無法重現(xiàn)的五個主要因素充分，並討論了良好的移液器選擇和技術(shù)如何避免因液體處理不準(zhǔn)確而導(dǎo)致可重現(xiàn)性差的問題進一步完善。
2 資料重現(xiàn)性危機(jī)重現(xiàn)性不僅是特定時間、地點(diǎn)或人物的人為現(xiàn)象競爭力，它也是科學(xué)方法的基石調整推進，是確認(rèn)所觀察到的結(jié)果是否符合假設(shè)的必要條件C製性梗阻？茖W(xué)界依靠同儕審查出版流程來確苯◤姳Ｗo？蒲谐晒麥?zhǔn)確無誤，這意味著從表面上看探索，大多數(shù)科研成果一經(jīng)發(fā)布便很少受到質(zhì)疑堅持先行。因此，很少有人會重複這些研究滿意度，已發(fā)布研究結(jié)果即被視為事實情況較常見，而研究領(lǐng)域則可能建立在一個不可重現(xiàn)的研究結(jié)果之上。我們目前專注於減少在科學(xué)研究中使用動物進(jìn)行實驗（例如「3 R」框架主要抓手，透過動物替代體製、動物減少和研究改進(jìn)來進(jìn)行更人道的動物研究），而這進(jìn)一步加劇了這一現(xiàn)象創新科技。這個框架建議優(yōu)先考慮「真正進(jìn)入知識庫」的研究服務延伸，但這無法促進(jìn)現(xiàn)有知識的重現(xiàn)。然而具有重要意義，如果特定研究結(jié)果無法在不同環(huán)境下由不同人員重現(xiàn)進一步，則我們不能這一結(jié)果視為真正的科學(xué)現(xiàn)象，只能將其視為特定實驗條件下的產(chǎn)物強大的功能。
John Ioannidis於2005年發(fā)表了題為「為何大多數(shù)已發(fā)表的研究結(jié)果都是錯誤的」(1) 的期刊文章實際需求，此文頗具爭議，（生物）醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的可重現(xiàn)性危機(jī)由此成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)優勢。模擬與建模結(jié)果表明善謀新篇，對於大多數(shù)研究設(shè)計而言，已發(fā)布研究結(jié)果很可能是錯誤的便利性，它們只是當(dāng)前普遍偏差下的準(zhǔn)確測量方法。
近二十年前就有人提出了資料重現(xiàn)性問題，如今這一問題仍然普遍存在提供有力支撐。近期切實把製度，《自然》的一項調(diào)查結(jié)果顯示，70%以上的科學(xué)研究人員報告未能重現(xiàn)已發(fā)表的實驗結(jié)果 (2)最深厚的底氣。而令人擔(dān)憂的是協同控製，50%以上的科學(xué)研究人員報告未能重現(xiàn)自己的實驗≌駣^起來，F(xiàn)在大家一致認(rèn)為品質，這個問題非常嚴(yán)重利用好，已經(jīng)導(dǎo)致生物學(xué)領(lǐng)域和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域深陷重現(xiàn)性危機(jī)。大多數(shù)研究人員表示解決問題，儘管自己認(rèn)同這個觀點(diǎn)系列，但還是相信已發(fā)表的文獻(xiàn)。
重現(xiàn)性危機(jī)不僅擾亂了基礎(chǔ)科學(xué)的知識庫的有效手段，也嚴(yán)重影響了工業(yè)應(yīng)用的開發(fā)計畫統籌推進。顯然，我們需要利用解決方案來提高數(shù)據(jù)可靠性和解決科學(xué)領(lǐng)域的重現(xiàn)性危機(jī)關鍵技術，但有哪些因素會導(dǎo)致缺乏可重現(xiàn)性了解情況？
3 影響資料重現(xiàn)性的因素想要應(yīng)對重現(xiàn)性危機(jī)，首先要承認(rèn)科學(xué)界存在資料重現(xiàn)性問題技術研究，然後應(yīng)該考慮和了解影響資料可靠性的主要因素重要的，再在整個實驗過程中（從初始規(guī)劃到實驗程序和最終分析）採取步驟來避免這些因素。
3.1 文化可以說姿勢，沒有察覺到研究不可重現(xiàn)的主要原因在於相互融合，當(dāng)前科學(xué)文化不鼓勵發(fā)表負(fù)面研究結(jié)果【G色化？茖W(xué)研究人員無法重現(xiàn)某一實驗通常是因為沒有正確進(jìn)行實驗不同需求、缺乏必要技能，或是因為可用方法方案的細(xì)節(jié)不足以支持重現(xiàn)實驗保持穩定。然而總之，即使在眾多實驗室成員在嘗試多次仍失敗後認(rèn)為實驗不可重現(xiàn)，各雜誌也可能不願意發(fā)表負(fù)面研究結(jié)果支撐作用。即使發(fā)表了工藝技術，負(fù)面研究結(jié)果通常被視為具有爭議且會被反駁。正如《自然》的調(diào)查結(jié)果中所述規模，「數(shù)位曾公開發(fā)表實驗重現(xiàn)失敗結(jié)果的受訪者表示近年來，編輯和審稿人要求將這些研究和初始研究進(jìn)行比較“l展目標奮鬥！沟诳J(rèn)識到了這個問題技術先進，因而發(fā)表負(fù)面研究結(jié)果比以往更容易，其中包括雜誌PLOS One雜誌的特刊“The Missing Pieces：負(fù)面結(jié)果延伸、無結(jié)果和無法得出結(jié)論的研究結(jié)果”文章合集(3)認為。
3.2 強(qiáng)調(diào)P值研究中不可重現(xiàn)率較高很可能是因為研究者根據(jù)在單一研究中觀察到的統(tǒng)計顯著性（通常P值小於0.05）聲稱得出結(jié)論性結(jié)果。顯著性P < 0.05這一黃金標(biāo)準(zhǔn)也可能導(dǎo)致研究人員錯誤地解讀錯誤的結(jié)果新趨勢，這一標(biāo)準(zhǔn)不一定能夠確認(rèn)研究結(jié)果具有實踐意義和重要意義反應能力，也無法表明在其他地方進(jìn)行同一實驗時數(shù)據(jù)是否仍然具有顯著性共謀發展。依賴是否達(dá)到統(tǒng)計顯著性來認(rèn)定某項研究是否值得發(fā)表，導(dǎo)致了科學(xué)研究人員採取「p值操縱」的做法 (4)結構重塑。這種惡意行為可能包括設(shè)計和進(jìn)行實驗市場開拓，透過資料疏浚、資料捕魚大大縮短、資料探勘或資料擷取來確保結(jié)果具有顯著性或利用資料分析要落實好。
3.3 缺乏透明度和原始數(shù)據(jù)僅在最近幾年，才開始鼓勵向研究人員提供研究背後原始數(shù)據(jù)的完全存取權(quán)更默契了。然而先進技術，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，因為研究成果可以透過商業(yè)化產(chǎn)生巨大財富不合理波動，數(shù)據(jù)收集和分析的具體方式仍然缺乏透明度宣講手段。老實說，期刊文章有字?jǐn)?shù)限制積極拓展新的領域，因此在許多情況下難以包含成功重現(xiàn)複雜實驗所需的所有方法細(xì)節(jié)配套設備。而在其他需要考慮商業(yè)前景或智慧財產(chǎn)權(quán)前景的領(lǐng)域，原稿中可能會刪除或混淆專有資訊多種方式。如果原始資料本身提供了有價值的產(chǎn)物（例如影響藥物研發(fā)的基因組資料庫）對外開放，則這些資料通常會出於商業(yè)原因而處於保密狀態(tài)。因此深入交流研討，外部研究人員無法獨(dú)立驗證已發(fā)表的研究結(jié)果資料，因此無法確定該結(jié)果是否具有可重現(xiàn)性和結(jié)論性。
3.4 實驗室規(guī)範(fàn)和記錄保存不當(dāng)從較為基本的層面來講關註度，實驗不可重現(xiàn)可能是因為初始實驗科研人員和重複實驗科研人員的實驗室技術(shù)不佳橫向協同，他們應(yīng)該盡可能採用標(biāo)準(zhǔn)方式來施用技術(shù)，以便其他科研人員也可以使用這些技術(shù)敢於挑戰。如果針對某一特定方案（可能無法透過文字方案來理解）開發(fā)了新技術(shù)不斷創新，則可以隨附影片教學(xué)。細(xì)小步驟可能會被忽略提供了遵循，沒有包含在已發(fā)布的方法方案中參與水平，因此，記錄不詳細(xì)也會影響可重現(xiàn)性服務效率。
3.5 非標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備的品質(zhì)各異多種可用的實驗室設(shè)備和儀器也會影響方案的標(biāo)準(zhǔn)化明確相關要求。不同品牌儀器的整體功能也許相似，但其精準(zhǔn)度可能各有不同統籌發展。不同品牌之間靈敏度深化涉外、特異性、檢測程度等方面的差異可能會對實驗結(jié)果產(chǎn)生顯著影響生產製造。因此參與能力，需要提供詳細(xì)的材料和設(shè)備清單以及已發(fā)布的方案合理需求，明確說明所用物品的品牌、型號充分發揮、批號等資訊高質量。應(yīng)盡可能使用優(yōu)質(zhì)設(shè)備和材料，以減少可能與更廉價材料相關(guān)的差異提高。設(shè)備未經(jīng)校準(zhǔn)以及在科研人員不知情的情況下更改實驗參數(shù)都可能會進(jìn)一步加劇這些問題機構。
4 透過易於實施的移液解決方案來提高重現(xiàn)性重現(xiàn)性危機(jī)是一大系統(tǒng)性問題的特性，科學(xué)方法的許多階段都需要考慮這個問題並採取解決方案交流，但可以從改進(jìn)簡單流程開始來提高數(shù)據(jù)可靠性。改進(jìn)涉及多個科學(xué)工作流程階段的流程可以提高資料可靠性提供堅實支撐，從而獲得高回報還不大。
我們的使命是創(chuàng)建可靠且易於驗證的高精度儀器，以幫助研究人員實現(xiàn)可重現(xiàn)的科學(xué)信息化技術。手動移液是一種容易忽略的生命科學(xué)工具發揮作用，這種工具要求準(zhǔn)確度要精確到微升級，可以說在所有過程中都使用得比較多逐步顯現，因此是提高可重現(xiàn)性的關(guān)鍵過程銘記囑托。幸運(yùn)的是，移液解決方案操作簡單且經(jīng)濟(jì)實惠自動化裝置，對整個工作臺工作流程中都有著正面影響示範。
4.1 選擇優(yōu)質(zhì)移液器如要實現(xiàn)可重現(xiàn)移液，要先選擇在整個移液循環(huán)（吸液和分液）中都準(zhǔn)確無誤的優(yōu)質(zhì)移液器有很大提升空間。移液管的真實值（亦稱為準(zhǔn)確度）是指吸取並分配接近容量設(shè)定所示的真實值或標(biāo)稱值溶液容量的能力運行好。移液器的精度是指在多次重複操作中分配相同容量溶液的能力。因此可能性更大，可以透過平衡高真實值和/或高精度來實現(xiàn)移液器的整體移液性能部署安排，從而分別實現(xiàn)低系統(tǒng)誤差和/或低隨機(jī)誤差。
選擇優(yōu)質(zhì)移液管後技術，仍有多種因素會對準(zhǔn)確度產(chǎn)??生負(fù)面影響：
使用者技術(shù)
環(huán)境因素（包括溫度推廣開來、濕度和壓力）
液體樣品特性（即高黏度）
儀器誤差
所選移液器應(yīng)採用先進(jìn)的製造工藝資源配置，以達(dá)到能維持長期準(zhǔn)確（真實值和精度）的允差。購買新的移液器時姿勢，應(yīng)比較供應(yīng)商之間所述的系統(tǒng)誤差規(guī)格和隨機(jī)誤差規(guī)格問題分析。為說明不同品牌之間的差異，表1比較了2 μL交流研討、20 μL更加完善、200 μL和1000 μL 標(biāo)稱值範(fàn)圍內(nèi)高階移液管和低端移液管之間的技術(shù)規(guī)格形式。整體而言，高端儀器的隨機(jī)誤差性能更佳支撐作用。此外日漸深入，應(yīng)特別注意低容量移液器— 即分液容量小於10 μL的移液器，因為移液技術(shù)和樣品黏度對低容量分液的負(fù)面影響較大同時，會導(dǎo)致準(zhǔn)確度降低和預(yù)期容量減小廣度和深度。因此順滑地配合，使用者應(yīng)選擇出廠時儀器誤差較小的移液器。
對於精度和重複性要求較高的分子工作流程（如逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)，RT-PCR）來說互動講，劣質(zhì)儀器相對較低的精度會對實驗的可重現(xiàn)性產(chǎn)生顯著影響生產體系。
4.2 確保正確實施日常維護(hù)取得了一定進展、校準(zhǔn)與性能驗證移液器是實驗室中廣泛使用的設(shè)備高質量，經(jīng)常遭受磨損。移液器由多種機(jī)械零件構(gòu)成資源優勢，這些零件彼此可以移動高效利用，經(jīng)常接觸到腐蝕性化學(xué)物質(zhì)或有害化學(xué)物質(zhì)。和所有其他機(jī)械性產(chǎn)品一樣估算，移液器零件會隨著時間的推移而劣化講理論，進(jìn)而嚴(yán)重影響移液管性能。高端的移液器和儀器可以保證比低價的替代品更經(jīng)久耐用不要畏懼，但它們?nèi)匀恍枰ㄆ诰S護(hù)服務為一體、驗證和校準(zhǔn)，以確保在實驗中保持一致的性能和可重現(xiàn)性大大縮短。
移液器維護(hù)移液管維護(hù)包括日常保養(yǎng)和預(yù)防性維護(hù)要落實好。妥善保養(yǎng)移液管可盡量提高維修間隔期間的效能、防止移液管因損壞而無法使用更默契了∠冗M技術？梢赃M(jìn)行簡單的日常活動不合理波動，以確保移液器正常運(yùn)作宣講手段。
定期檢查移液管是否有任何可見的損壞跡象，例如移液管外殼有刮痕或破損表示。這項活動可以指示移液管是否掉落全面闡釋，移液管掉落可能會導(dǎo)致?lián)p壞，並且需要維修或校準(zhǔn)競爭力所在。
定期清潔移液器引人註目，以防灰塵或污垢進(jìn)入工作件，進(jìn)而導(dǎo)致工作件摩擦或卡住。使用製造商建議的無磨蝕性清潔溶液清潔移液器好宣講，然後使用無絨布擦拭移液器註入新的動力。
正確消毒移液器（將暴露在紫外光下的時間限制在10-15分鐘），以免移液器外殼的完整性受損。持續(xù)高壓滅菌導(dǎo)致移液器經(jīng)常暴露在高溫雙重提升、高壓和高濕度條件下，這也可能影響其性能事關全面，因此應(yīng)在每次高壓滅菌後進(jìn)行性能驗證表現明顯更佳。
安全存放移液器，將其置於適當(dāng)?shù)暮醒b或平臺裝置中技術節能，以防掉落和損壞指導。
切勿倒置移液管（液體處理期間），以免液體進(jìn)入儀器聯動。濾芯吸頭有助於防止液體和污染物進(jìn)入移液管增持能力。
日常保養(yǎng)移液器有助於在維修間隔期間維持移液器性能共同努力，但預(yù)防性維護(hù)對於防止移液器突然故障仍然至關(guān)重要行業內卷。 Rainin服務(wù)數(shù)據(jù)顯示，如果沒有進(jìn)行任何預(yù)防性維護(hù)或執(zhí)行定期維修程序逐漸完善，那麼即使每年都進(jìn)行檢查參與能力，移液器的故障率仍會達(dá)20%或以上。大約95%的移液器故障都是因為密封系統(tǒng)缺陷是目前主流，這種故障可以預(yù)測充分發揮，也可以預(yù)防。預(yù)防性維護(hù)旨在更換磨損的組件（例如O形環(huán)充分發揮、密封件和柱塞）選擇適用，以免其發(fā)生故障並進(jìn)一步損壞周圍部件。
根據(jù)製造商的建議和我們的豐富經(jīng)驗設計，在正常使用條件下業務指導，密封件應(yīng)每年至少更換一次，而吸頭支架和活塞應(yīng)每三到五年更換一次優化程度。預(yù)防性維護(hù)有助於確保維持移液器效能積極性、防止移液器故障和維持實驗合規(guī)和可重現(xiàn)，進(jìn)而避免工作流程中斷不斷豐富。
校準(zhǔn)建議每年至少進(jìn)行一次預(yù)防性維護(hù)實施體系，以確保移液器功能操作正常，但需要增加移液管的校準(zhǔn)頻率各有優勢，以確保其準(zhǔn)確度保持在（亞）微升級效果較好。真實的吸液量和分液量無從知曉，因此移液器校準(zhǔn)不當(dāng)會顯著降低實驗的可重現(xiàn)性，進(jìn)而導(dǎo)致已發(fā)布的實驗方案不準(zhǔn)確等多個領域。
全部 · 2025年18月19日
