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如何提高移液準(zhǔn)確度技術創新?

簡(jiǎn)介移液是當(dāng)今生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室中最常見(jiàn)的活動(dòng)之一向好態勢。精確測(cè)量和轉(zhuǎn)移從微升到毫升的極少量液體需要操作員具有良好的移液技術(shù)增強,使用經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)的移液器並選擇適合任何給定協(xié)議的吸頭重要意義。因此,將移液視為一個(gè)系統(tǒng)是一種始終如一地產(chǎn)生準(zhǔn)確結(jié)果的行之有效的方法∫巹??茖W(xué)防控、培訓(xùn)和不斷的實(shí)踐表明,某些技術(shù)(例如著力提升,吸入角度、吸入和分配速率等)可以提高移液準(zhǔn)確性傳遞。但什麼是移液準(zhǔn)確性融合?它是如何定義的?它是如何計(jì)算的相關性?本文旨在透過(guò)提供簡(jiǎn)單而清晰的範(fàn)例並描述「不確定性」一詞及其對(duì)移液的影響完成的事情,以及考慮這種不確定性的重要性,幫助任何移液器使用者理解移液準(zhǔn)確性背後的基本概念和數(shù)學(xué)穩定。

系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差之間的關(guān)系

移液精度移液精度衡量移液器使用者提供等於或接近選定體積的液體分配量的能力改造層面。分配體積的精度取決於以下因素:

  • 與移液器儀器和吸頭相關(guān)的誤差
  • 樣品中的液體類型(物理和/或化學(xué)性質(zhì))
  • 使用者技術(shù)
  • 環(huán)境影響,例如環(huán)境溫度和氣壓
    與移液器儀器和吸頭相關(guān)的誤差
    兩種類型的誤差會(huì)影響單個(gè)分配體積的質(zhì)量:
    系統(tǒng)誤差
    在移液術(shù)語(yǔ)中優勢與挑戰,系統(tǒng)誤差 (SE) 衡量分配體積與預(yù)期體積的接近程度經驗分享。
    系統(tǒng)誤差來(lái)自儀器本身(移液器),并且對(duì)于每個(gè)分配體積都保持相同的值或比例趨勢。系統(tǒng)誤差的示例包括使用未校準(zhǔn)的移液器或使用非標(biāo)準(zhǔn)吸頭(例如有力扭轉,加長(zhǎng))。一般而言一站式服務,系統(tǒng)誤差是可預(yù)測(cè)的廣度和深度,因此可以減少(例如,使用校準(zhǔn)的移液器)引領作用。系統(tǒng)誤差可以定性地描述為“真實(shí)度”加強宣傳。
    隨機(jī)誤差
    隨機(jī)誤差 (RE) 是分配體積的可重復(fù)性。在移液術(shù)語(yǔ)中用的舒心,隨機(jī)誤差衡量在保持相同實(shí)驗(yàn)條件下技術發展,相同數(shù)量的分配體積彼此之間的接近程度。顧名思義集成,隨機(jī)誤差是不可預(yù)測(cè)的更為一致,并且對(duì)于每個(gè)分配體積而言都不相同。
    隨機(jī)誤差的例子包括溫度波動(dòng)和移液技術(shù)技術的開發。隨機(jī)誤差可以定性地描述為“精度”研究與應用。
    系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差如何影響整體移液精度?精度是系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差的組合(圖 1)更高效。

單次分配體積的不確定性原則上積極影響,移液器使用者應(yīng)校正已知系統(tǒng)誤差的測(cè)量值。對(duì)於移液而言,這意味著需要從每個(gè)分配體積中減去系統(tǒng)誤差越來越重要。此步驟不太實(shí)用線上線下。相反,「單次分配體積的不確定性」考慮了系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差醒悟。它使用以下近似方程式計(jì)算數據顯示,此後縮寫為分配體積的不確定性:分配體積的不確定性(μL) = | 系統(tǒng)誤差| + k * 隨機(jī)誤差此方程式用於估計(jì)單次分配體積的不確定性,當(dāng)移液器使用者需要驗(yàn)證其移液器的性能時(shí)很有用也逐步提升。在此方程式中記得牢,k 是擴(kuò)展因子。擴(kuò)展因子也稱為覆蓋因子重要的作用,根據(jù)定義的標(biāo)準(zhǔn)偏差值確定分配體積的置信度更多可能性。例如,如果 k = 1足夠的實力,則分配體積的置信度為 68.3%緊迫性。如果 k = 2,則信賴度為 95.5%更適合,如果 k = 3高效,則信賴度為 99.7%。實(shí)際上要素配置改革,68% 的置信度從未被推薦深度,因?yàn)樗试S「太多」錯(cuò)誤測(cè)量(即分配量過(guò)低或過(guò)高)。另一方面核心技術體系,99% 的置信度太嚴(yán)格開拓創新,幾乎沒(méi)有失敗的餘地。在科學(xué)協(xié)議中必然趨勢,通常接受 95% 的置信度促進善治。在移液中,95% 的置信度意味著多樣性,如果移液器使用者必須在相同條件下(移液器發揮效力、吸頭、技術(shù)和樣品)分配相同體積20 次明顯,則19 次分配將在可接受的不確定性(置信範(fàn)圍)內(nèi)安全鏈,且只有一個(gè)分配體積會(huì)被拒絕(即分配量過(guò)低或過(guò)高)。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)波動(dòng)圖

解釋移液中的不確定度如果移液器的不確定度為 20 ± 2 μL充分,則表示移液器使用者確信實(shí)際分配的體積在18 至 22 μL 之間進一步完善。解釋移液不確定度的一種方法是使用者對(duì)預(yù)期體積與分配體積的接近程度的最佳估計(jì)。

根據(jù)先前的信息競爭力,可以確定覆蓋因子是置信水準(zhǔn)的函數(shù)調整推進。以下範(fàn)例說(shuō)明了置信水準(zhǔn)和重複次數(shù)在估計(jì)平均值狀況、標(biāo)準(zhǔn)差和不確定度方面的影響。

移液精度範(fàn)例一旦確定了系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差機製,計(jì)算移液中的不確定度就相對(duì)簡(jiǎn)單且易於理解全過程。案例1:標(biāo)稱量程對(duì)移液精度的影響假設(shè)使用者想要估計(jì)經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)的Rainin XLS+ L-20 移液器的不確定度,該移液器使用10 次重複(即重複的單次分配量)輸送20探討、10和2 μL DI 水不負眾望。遵循製造商針對(duì)此特定 20 μL 移液器發(fā)布的規(guī)格:

實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)

使用不確定度方程式不確定度(μL) = | 系統(tǒng)誤差(μL) | + k* 隨機(jī)誤差(μL)然後:如果V = 20 μL,則不確定度= | 0.20 (μL) | + k* 0.06 (μL)如果V = 10 μL調解製度,則不確定度= | 0.15 (μL) | + k* 0.05 (μL)如果V = 2 μL精準調控,則不確定度= | 0.15 (μL) | + k* 0.04 (μL)如果所需的信心水準(zhǔn)為 95%,則分配體積數(shù)為 10 (n = 10)創新內容,則覆蓋率因子 k = 2機遇與挑戰。不確定度(20 μL) = | 0.20 (μL) | + 2* 0.06 (μL) = 0.32 μL (1.6%)不確定度(10 μL) = | 0.15 (μL) | + 2* 0.05 (μL) = 0.25 μL (2.5%)不確定性(2 μL) = | 0.15 (μL) | + 2* 0.04 (μL) = 0.23 μL (11.5%)這些結(jié)果表明廣泛關註,不確定性與標(biāo)稱容量有關(guān)善於監督。當(dāng)我們將移液器操作得更接近其最大標(biāo)稱容量 (100% = 20 μL) 時(shí),即使假設(shè)置信度較高就能壓製,相對(duì)不確定性也會(huì)變得更小更合理。在所給出的範(fàn)例中,與移液器在10% 標(biāo)稱容量附近操作時(shí)的不確定性相比更優美,置信度為95.45% 的20 μL(100% 標(biāo)稱容量)的不確定性要小七倍各方面。

如果用戶決定降低置信度,會(huì)發(fā)生什麼情況成效與經驗?使用相同條件但置信度為 68%適應性,則 k = 1(再次強(qiáng)調(diào),不建議將置信度降低到 68%稍有不慎,因?yàn)檫@會(huì)導(dǎo)致給定協(xié)議中出現(xiàn)「太多」失斨匾饔?。2淮_定性(20 μL) = | 0.20 (μL) | + 1 * 0.06 (μL) = 0.26 μL (1.3%)不確定度(10 μL) = | 0.15 (μL) | + 1 * 0.05 (μL) = 0.2 μL (2%)不確定性(2 μL) = | 0.15 (μL) | + 1 * 0.04 (μL) = 0.19 μL (9.5%)

比較兩組結(jié)果(68% 和 95% 置信度)最為顯著,可以確定不確定性是置信度的函數(shù)尤為突出。置信度越高,不確定性越大自行開發。

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